Treg细胞转录因子-Foxp3基因多态性与中国汉族人群Graves病的相关性研究

发布时间：2019-01-22 14:55

【摘要】：第一部分Graves病患者131Ⅰ治疗前后Treg和Th17细胞相关细胞因子的表达及临床意义目的：了解Graves病(Graves' disease GD)患者131I治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)中Thl7及Treg细胞相关的细胞因子表达水平的变化,探讨其在GD发生发展过程中的作用。方法：通过实时荧光定量RT-PCR方法分别检测45例GD患者131Ⅰ治疗前、后及40例正常人外周血PBMC中Foxp3、IL-17、IL-23、IL-27和IFN-γ在mRNA水平的表达变化。通过化学发光法检测GD患者甲状腺功能水平,并利用SPSS 17.0对其与细胞因子的表达水平进行相关性分析。结果：131Ⅰ治疗前,初诊GD患者(To组)PBMC中Foxp3的表达明显降低(P0.0001),IL-17、IL-23、IL-27和IFN-γ的表达明显高于正常对照组(P0.0001)。131I治疗一月后(T1组)Foxp3的表达比T0组有所回升(P=0.0391),但仍低于对照组(P=0.0150)；IL-17、IL-23、IL-27比T0组均有一定程度的下降(P0.05)但仍高于对照组(P0.001);IFN-γ趋于正常水平,与对照组无明显差异(P=0.3945)。相关性分析得出,Foxp3与FT3、FT4、TRAb呈负相关,同时Foxp3与IL-17的表达亦呈负相关性；IL-17、IL-23与FT3、FT4均呈正相关；TRAb与IL-23和IL-27的表达水平呈正相关。结论：Treg及Th17相关的细胞因子在GD的发生、发展中有着重要的作用,131Ⅰ治疗可通过影响其细胞因子的表达起到治疗GD的作用。第二部分Treg细胞转录因子—Foxp3基因多态性与中国汉族人群GD易感性的相关性研究目的：探讨Foxp3基因启动子中-2383、-3279、-3499和非编码区IVS9+459共4个SNP位点与中国汉族人群GD的易感性。方法：收集308名GD患者和306名健康体检者作为对照,提取外周血,运用PCR-RFLP的方法检测Foxp3基因4个SNP位点的基因型,计算基因型与等位基因频率。同时用在线SHEsis统计学软件对SNP位点进行连锁不平衡分析和单倍体型分析。结果：-3279位点,AA/CA基因型在GD患者中的频率显著高于对照组(36.4% vs26.5%,P=0.008),等位基因A的频率也明显增高(21.4% vs 15.O%,P=0.004)。同时AA/CA基因型在女性GD中的频率高于男性GD患者。在IVS9+459位点上,基因型CC的频率在GD中明显升高(P=0.006,OR=2.781,95%CI:1.332.6.187).-2383位点和-3499位点的基因型和等位基因频率在GD患者和健康对照中没有明显的区别。我们对Foxp3基因启动子区中3个SNP位点进行单倍体型分析发现,CCA-CAA和TCA三个单体型在GD和对照组中的分布存在着明显的差异(P0.0001,P=0.0008和P0.0001).CAA和TCA单体型在GD患者中的频率较高,增加GD的患病风险(16.5%vs 10.2%,OR=1.777,95%CI 1.266-2.494和6.5%vs 1.7%,OR=3.979,95%CI 2.001-7.913):而CCA单体型可降低GD的发病风险(54.1%vs 65.4%,OR=0.610,95% CI 0.478-0.778).结论：中国汉族人群GD的易感性与-3279位点和IVS9+459位点的基因多态性相关,与-2383和-3499位点无关。CAA和TCA单体型单体型为GD的风险因子,增加GD的易感性,而CCA单体型可作为一个保护性因子降低GD的易感性。第三部分Foxp3基因SNP在GD患者中引起的功能性变化研究目的：介于Foxp3基因多态性与GD的易感性相关,本次研究主要是为了探讨Foxp3基因中的SNP在GD患者中所引起的功能性变化。方法：采用PCR和定向克隆技术,将不同单倍体型CCA和CAA的Foxp3基因启动子序列克隆到pGL3-Basic载体中,转染293T和HeLa细胞后检测启动子活性的变化。实时荧光定量PCR检测不同基因型的GD患者Foxp3基因的表达水平,同时利用生化分析仪检测不同基因型GD患者甲状腺功能及自身抗体水平的差异。结果：在-3279位点,携带AA/CA基因型的GD患者的Foxp3基因相对表达水平明显低于携带CC基因型的GD患者(P--0.004)。携带-3279位点CA基因型的GD病患者的血清FT3的水平明显低于携带CC或者AA基因型的GD患者(P=0.045,P=0.018)。此外,携带-3279位点A等位基因的GD患者血清TSH水平升高,而TRAb的水平降低(P=0.014,P=0.017)。携带-2383位点TT基因型的GD患者的血清FT3水平较高(P=0.032,P=0.021),携带-3499位点A等位基因的GD患者的血清TGAb水平明显升高(P=0,029)。另外,在293T和HeLa两种细胞系中,pGL3-CAA共转染后的相对荧光强度明显低于pGL3-CCA转染后的相对荧光强度(P=0.030和P=0.011)。结论：Foxp3基因-3279位点由等位基因C突变为A后,其启动子活性至少降低40%左右,同时Foxp3基因mRNA水平的表达也显著降低,GD患者的甲状腺功能也明显不同。-3279位点为一功能性SNP,为GD的治疗提供了新的靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R581

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本文编号：2413321