利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得水稻OsYUCCA1基因突变体

发布时间：2019-06-19 22:39

【摘要】：为研究植物激素生长素在模式作物水稻中的功能,我们利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,设计水稻生长素合成基因Os YUCCA1的两个靶位点,构建Os YUCCA1基因的敲除载体。通过对Os YUCCA1基因序列分析,将合成的靶点序列插入含hsp Cas9n的载体中,再与p CAMBIA1300重组,构建基因编辑载体,通过农杆菌介导的方法转化水稻品种9522。从78棵转基因苗中鉴定得到针对Os YUCCA1的3种突变类型,包括26棵在外显子第260号碱基处插入碱基A或T两种类型纯合突变和22棵在外显子第447号碱基处插入A、444号碱基C被T替换、445号碱基G被C替换的杂合突变类型。通过分析,发现3种突变株系都存在移码现象而使氨基酸提前终止致使基因突变。本研究成功利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除了水稻Os YUCCA1基因,为进一步研究Os YUCCA1基因功能提供了理论参考依据。
[Abstract]:In order to study the function of plant hormone auxin in model crop rice (Oryza sativa L.), we designed two target sites of rice auxin synthesis gene Os YUCCA1 by using CRISPR-Cas9 gene editing technique, and constructed the knockout vector of Os YUCCA1 gene. By analyzing the sequence of Os YUCCA1 gene, the synthesized target sequence was inserted into the vector containing hsp Cas9n, and then recombined with p-CAMBIA1300 to construct the gene editing vector, and the rice variety 9522 was transformed by Agrobacterium tumefaciens mediated method. Three mutation types of Os YUCCA1 were identified from 78 transgenic seedlings, including 26 homozygous mutations of base A or T inserted at base 260 in exons and A inserted at base 447 of exons. 444 base C was replaced by T and 445 base G was replaced by C. Through the analysis, it was found that all the three mutants had the phenomenon of transcoding, which resulted in the early termination of amino acids and the mutation of genes. In this study, CRISPR-Cas9 gene editing technique was successfully used to knock out rice Os YUCCA1 gene, which provided a theoretical reference for further study of Os YUCCA1 gene function.
【作者单位】： 上海交通大学生命科学技术学院;
【分类号】：Q943.2

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本文编号：2502693