新疆地区牛支原体分离鉴定及Vsp基因分子流行病学研究

发布时间：2019-07-12 12:41

【摘要】：牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是一种可感染牛的致病性病原体,可导致牛发生肺炎、乳房炎、关节炎、角膜结膜炎等多种疾病,常与多种病原体混合感染,难以彻底治愈。为进一步确定新疆地区牛支原体的感染情况、代表株的基因组成及毒力基因遗传特性,本研究从哈密、塔城等六个不同地区的9个规模化牛场采集了疑似牛支原体感染的病死犊牛肺脏组织、关节液及鼻拭子41份,开展了牛支原体病原分离与PCR鉴定,分离株可变表面脂蛋白VspE的基因分型和代表株全基因测序分析,为牛支原体病的防治及新型疫苗的研发提供病原分子流行病学依据。研究内容与结果如下:1.采用实验室自主研发的牛支原体培养基,对采集的41份疑似牛支原体病病料进行病原分离培养及PCR鉴定,结果从41份样品中分离获得24株具有支原体典型菌落的培养物,分离株经牛支原体特异性基因oppD/F PCR检测均为牛支原体,阳性率为58.5%,分离株序列分析显示24株新疆不同地区分离株间核苷酸和氨基酸同源性均较高,与国际标准株PG45(CP002188.1)氨基酸同源性为97.3%~100%,具有高度同源性。研究结果为新疆地区牛支原体分子流行病学及免疫预防提供理论依据。2.对新疆牛支原体代表株XJ1260进行全基因组测序,利用生物信息学软件进行分析,结果表明,新疆牛支原体XJ1260株基因组大小为953,064bp,GC含量为29.97%,测序组装后产生114个scaffolds,基因组组分经分析后发现,串联重复序列208个,总长为16,559bp,占基因组全长的1.74%,tRNA 90个,rRNA9个,基因组中有与新陈代谢相关的基因。3.为研究新疆不同地区牛支原体分离株Vsp基因的遗传特性,选择13株新疆不同地区分离株,根据GenBank登录牛支原体PG45的VspE序列(GenBank登录号:AH008162.2),设计引物,经PCR检测Vsp基因及序列分析。结果表明13株新疆分离株与标准株PG45的核苷酸同源性64.1%~95.8%,表明该基因片段在保守区域内。13株新疆不同地区分离株间核苷酸同源性为62.5%~100%,存在一定变异。
文内图片：

图片说明：病原的分离在实验室自制培养基中盲传 3~4 代后，从 24 份中得到牛支原体培养物，将培到牛支原体固体培养基上置 37℃ 5%CO2 培养箱中生长 4~5 d，在显微镜下可“煎蛋状”菌落，如图 2 所示，初步鉴定为牛支原体，分别命名为 XJKT601T601283、XJKT601273、XJKT172、XJKT173 、XJHMN1、XJHMN2、XJSLi-1 等。图 1 病理解剖变化（黄白坏死灶；粘连）Fig 1 The changes of PathologicalAnatomy(Yellow and white necrosis;adhesion)
文内图片：图2分离株菌落形态(40×）

图片说明：基中盲传 3~4 代后，从 24 份中得到牛养基上置 37℃ 5%CO2 培养箱中生长 4如图 2 所示，初步鉴定为牛支原体，，分1273、XJKT172、XJKT173 、XJHMN图 1 病理解剖变化（黄白坏死灶；粘连）ges of PathologicalAnatomy(Yellow and white
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.23

【参考文献】