【摘要】：作为世界上养殖最广泛的淡水鱼类之一,鲤鱼具有适应性强,生长速度快,易养殖,饲料转化效率高等特点,其肉质鲜美并具有很高的营养价值,因而对优良品质鲤鱼选育的需求日益增加。连接蛋白Cx43是缝隙链接蛋白Cx基因家族的成员,也是表达最广泛的连接蛋白。在胚胎发育的早期,连接蛋白Cx43能在肌纤维中广泛表达,并通过低电阻的偶联促进胚胎肌纤维收缩。此外,在信号分子和代谢产物的传递的过程中Cx43也是不可或缺的。在哺乳动物、斑马鱼、青蛙和鸡的胚胎晚期以及出生后早期阶段Cx43的表达会有所下调,Cx43保守的表达模式暗示在此过程中存在着某种作用机制。另有研究表明Cx43是miR-1和miR-206共同的靶基因,并且Cx43在骨骼肌的融合过程中起到了至关重要的作用。在研究通过整体原位杂交方法检测Cx43基因在不同时期鲤鱼胚胎中的表达情况,以成肌分化因子MyoD为阳性对照。结果表明：受精后12h,Cx43基因在胚胎的眼周、头部以及心脏部位明显表达,同时在神经管和近轴细胞有表达且一直延伸至胚胎的尾牙；当鲤鱼胚胎发育至24h时,Cx43基因主要集中在神经管以及背部近轴细胞中表达,并在鲤鱼胚胎的体节中表达明显,在受精后24h的胚胎中,Cx43基因在所有体节中均有表达,且表达最强；而受精后48h,除头部外,在体轴和近轴细胞等处表达量明显下降,体节几乎观察不到Cx43的表达。RT-PCR结果也显示Cx43基因在24h的鲤鱼胚胎中表达量最高。表明Cx43基因主要在鲤鱼胚胎早期发育过程中开始表达并发挥作用,随着鲤鱼胚胎的孵化Cx43表达量下降。利用生物信息学软件预测在斑马鱼Cx43基因中存在与miRNA-1和miRNA-206结合的靶位点,通过与鲤鱼功能基因组比对,结果表明：鲤鱼Cx43基因的3’UTR区能够和斑马鱼Cx43基因绝大部分匹配,且在miRNA-1和miRNA-206结合的种子序列处前7位碱基能够完全匹配。为了进一步检测预测结果,通过构建双荧光素酶报告载体PMIR-Cx43,在小鼠成纤维细胞3T3中检测miRNA-1和miRNA-206对Cx43的调控作用,结果表明：miR-206能下调pMIR-Cx43-3'UTR的荧光素酶活性,说明在鲤鱼肌肉组织中miR-206也能作用于Cx43的3’UTR区。
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【参考文献】
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2523912
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