TROP-2基因对人结肠癌细胞侵袭及上皮间质表型转化的影响

发布时间：2019-08-24 13:36

【摘要】：目的1.观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)与上皮间质表型转化(EMT)相关蛋白(E-钙黏蛋白,波形蛋白)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白在结直肠癌组织中表达情况,并探讨它们之间的相关性及临床意义;2.研究TROP-2基因过表达对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭、EMT的影响;3.探讨TROP-2调控EMT的分子机制。方法1.收集行手术切除且随访满5年的结直肠癌患者组织标本80例。全部病例术前均未行化疗、放疗及靶向治疗。应用免疫组化法检测标本中TROP-2与EMT相关蛋白及MMP-9蛋白的表达情况,分析它们与各临床病理参数间的关系,探讨TROP-2与EMT相关蛋白及MMP-9蛋白的相关性。2.将TROP-2慢病毒载体转染结肠癌SW480细胞,分别以未处理组为空白对照组(Con-A),以不包含TROP-2的为空载对照组(Con-B)。收集各组细胞,分别采用定量PCR和Western Blot方法检测TROP-2、E-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9的基因和蛋白;采用显微镜观察细胞形态学变化;采用平板克隆方法检测癌细胞增殖情况,分别采用划痕修复试验和Transwell方法检测癌细胞迁移和侵袭力情况。3.为进一步探讨TROP-2分子机制,采用核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷铵(PDTC)处理TROP-2过表达细胞株,以未用PDTC处理的慢病毒TROP-2组作为对照,分别采用定量PCR和Western Blot方法检测癌细胞E-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平。结果1.TROP-2,E-钙黏蛋白,波形蛋白和MMP-9蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为81.25%,16.25%,48.75%和72.5%。结直肠癌组织中,TROP-2表达与肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及5年生存率相关(P0.05);E-钙黏蛋白表达与肿瘤部位、浸润深度及5年生存率相关(P0.05);波形蛋白表达与肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及5年生存率相关(P0.05);MMP-9表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及5年生存率相关(P0.05)。结直肠癌组织中,TROP-2与波形蛋白及MMP-9在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.276,P0.05;r=0.421,P0.05),TROP-2与E-钙黏蛋白在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.628,P0.05)。2.与空白对照组和空载对照组比较,TROP-2慢病毒组TROP-2基因和蛋白水平明显升高;细胞形态学观察发现,TROP-2慢病毒组细胞变长,呈纺锤形,形态发生明显变化;空白对照组和空载转染组癌细胞呈鹅卵石形或多边形。提示癌细胞可能发生了EMT。定量PCR和Western Blot检测发现,与空白对照组和空载对照组比较,TROP-2慢病毒组波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平明显升高,而E-钙黏蛋白基因和蛋白水平明显降低;平板克隆方法发现,空白对照组、空载对照组和TROP-2慢病毒组克隆形成数分别为75±6、76±5和119±3(P0.05);划痕修复试验检测发现,空白对照组、空载对照组和TROP-2慢病毒组痕间间距分别为389±5(μm)、395±3(μm)和158±5(μm)(P0.01)。Transwell方法检测发现,空白对照组、空载对照组和TROP-2慢病毒组侵袭细胞数分别为89±4、92±5和139±6(P0.05)。3.采用NF-κB抑制剂PDTC处理TROP-2过表达细胞株后,定量PCR和Western Blot方法检测发现,与未用PDTC的慢病毒TROP-2组比较,波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平明显降低,而E-钙黏蛋白基因和蛋白水平明显升高。结论1.TROP-2与EMT相关蛋白在结直肠癌组织中与侵袭转移密切相关。2.TROP-2通过诱导EMT发生,增强结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。3.NF-κB/MMP-9是TROP-2调控结肠癌细胞EMT的重要途径之一。
【图文】：

tin 蛋白在大肠癌中阳性表达（×200） MMP-9 蛋白在大肠癌中阳性表达（×图 1 80 例结直肠癌组织免疫组化检测的结果表1 TROP-2蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系

图 2 TROP-2 与患者生存回归分析E-cadherin、Vimentin 和 MMP-9 在结直肠癌组织中表达的相关性ROP-2 阳性表达的结直肠癌患者中，Vimentin 阳性表达 36 例，，E-cadh 例，MMP-9 阳性表达 53 例。13 例 E-cadherin 阳性表达的结直肠癌患者
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35

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本文编号：2529000