荔枝SUMO结合酶基因LcSCE1的克隆与表达分析

发布时间：2019-09-27 10:36

【摘要】：通过RT-PCR和RACE技术,从荔枝胚性愈伤组织中克隆得到了SUMO结合酶1基因的全长cDNA序列,命名为LcSCE1。LcSCE1 cDNA全长为840 bp,CDS全长483 bp,预测可编码160个氨基酸。生物信息学分析发现:LcSCE1为带负电的亲水不稳定蛋白,没有信号肽和跨膜结构域,进化上,LcSCE1与麻风树SCE1蛋白亲缘关系最近。利用Real-time PCR技术研究了LcSCE1在不同组织部位的表达情况,发现该基因在"元红"荔枝各组织器官中均有表达,在新叶与芽中表达量最高,膨大期果核中该基因的表达量也显著高于成熟果核(p0.01)。此外,本研究还比较了该基因在醮核和正常核中LcSCE1的表达情况,发现它在醮核中的表达量显著高于正常核(p0.01)。本研究结果表明LcSCE1可能在荔枝生长发育及醮核产生过程中发挥着重要作用。
【图文】：

，切除几个在羧基端的氨基酸，从而使得未成熟的SUMO修饰蛋白前体转化为成熟的SUMO修饰蛋白；之后通过与SUMO活化酶(SUMO-activat-ingenzyme,SAE)的作用，成熟的SUMO修饰蛋白会经过SUMO活化酶转移到SUMO结合酶(SUMO-conjugatingEnzyme,SCE,又名Ubiquitin-conjugatingenzyme,UBC9)上；通过一个或多个的SUMOE3连接酶来识别目标蛋白，并将成熟的SUMO修饰蛋白连接到目标蛋白上；最后，在SUMO特异蛋白酶(SENPs)的作用下使SUMO修饰蛋白与目标蛋白解离，恢复到单独的游离状态(韦玮等,2008)，接着进行下一个SUMO化修饰的循环(图1)。植物SUMO化修饰过程与动物类似，也主要包括活化、结合、连接和去SUMO化4个环节(Novatchkovaetal.,2004;初冰和陈禹先,2013)。蛋白SUMO化修饰会影响目标蛋白的亚细胞定位(廖书胜,2008;Yangetal.,2012;李玲等,2013)、活性(Lietal.,2007;Kangetal.,2001)、信号传递功能(Lalioti,2002;过倩萍,2010;黄海等,2011)等，在生物生命活动中发挥着调节作用。SCE1基因是SUMO化修饰过程中的重要酶基因，它在动植物中的作用已有了大量报道。荔枝SCE1基因的相关研究图1植物SUMO化修饰过程(Geiss-FriedlanderandMatunis.,2007)Figure1ProcessofSUMOmodificationinplant(Geiss-Friedlan-derandMatunis.,2007)还未见报道，因此，本研究拟根据亚麻，大豆，甜橙和麻风树等SUMO结合酶基因的序列信息，利用RT-PCR与RACE技术获得荔枝SCE1基因并研究其在荔枝不同组织器官中的表达模式，以期为揭示LcSCE1在荔枝的作用机制奠定基矗1结果与分析1.1荔枝LcSCE1基因的全长cDNA的获得通过同源比对设计SCE1保守区域扩增引物，，扩增获得长度为315bp的保守序列，并通过所得到的保守序列设计3'RACE和5'RACE巢?

鞍祝囗

本文编号：2542665