miRNA调控昆虫精巢干细胞自我更新相关基因的保守性分析和靶标验证

发布时间：2019-11-07 05:04

【摘要】：【目的】发现昆虫精巢干细胞自我更新相关基因3'UTR上的保守miRNA靶位点,为深入研究昆虫精子发生进程中的miRNA-基因调控关系提供参考。【方法】使用Blast搜索27种全变态昆虫精巢干细胞自我更新相关基因,并预测这些基因的3'UTR。使用Target Scan预测这些基因3'UTR上的miRNA靶位点。对家蚕Bombyx mori和小菜蛾Plutella xylostella的Chinmo和Imp基因包含let-7-5p靶标点的3'UTR序列进行了克隆,使用双荧光素酶报告系统对其靶标关系进行验证。【结果】在27种全变态昆虫中发现了17个精巢干细胞自我更新相关基因。利用Target Scan在这些基因的3'UTR上预测到了203个保守的miRNA靶位点。其中Zfh-1,Chinmo,Ken及Imp的3'UTR上存在大量的miRNA靶位点,但miRNA靶位点数目在不同昆虫类群中也存在很大差异。其中,Chinmo及Imp 3'UTR上的let-7-5p靶位点在昆虫中保守。分别克隆了家蚕和小菜蛾Chinmo和Imp的3'UTR,通过双荧光素酶报告系统转染239T细胞证实了let-7-5p对Chinmo和Imp两个基因的调控作用。【结论】发现在4个昆虫精巢干细胞自我更新相关基因Zfh-1,Chinmo,Ken和Imp的3'UTR上存在大量的miRNA靶标位点。其中Chinmo及Imp基因3'UTR上let-7-5p靶位点在大多数全变态昆虫中保守,双荧光素酶报告系统实验证实了家蚕和小菜蛾中let-7-5p与Chinmo和Imp存在相互作用,为进一步研究miRNA在昆虫精子发生进程中的功能提供了参考。
【图文】：

8期马行洲等:miＲNA调控昆虫精巢干细胞自我更新相关基因的保守性分析和靶标验证853图1利用Miranda，Pita和ＲNAhybrid预测Chinmo与let-7-5p，，Imp与let-7-5p及Zfh-1与miＲ-12-5p的互作关系Fig.1PredictionofinteractionbetweenChinmoandlet-7-5p，Impandlet-7-5p，andZfh-1andmiＲ-12-5pbyMiranda，PitaandＲNAhybrid图2Chinmo3'UTＲ上的保守let-7靶位点Fig.2Theconservedlet-7targetsitesonthe3'UTＲofChinmo

8期马行洲等:miＲNA调控昆虫精巢干细胞自我更新相关基因的保守性分析和靶标验证853图1利用Miranda，Pita和ＲNAhybrid预测Chinmo与let-7-5p，Imp与let-7-5p及Zfh-1与miＲ-12-5p的互作关系Fig.1PredictionofinteractionbetweenChinmoandlet-7-5p，Impandlet-7-5p，andZfh-1andmiＲ-12-5pbyMiranda，PitaandＲNAhybrid图2Chinmo3'UTＲ上的保守let-7靶位点Fig.2Theconservedlet-7targetsitesonthe3'UTＲofChinmo


本文编号：2557114