桑蚕茧、蛹中黄酮类化合物及其相关基因表达分析

发布时间：2019-11-07 18:54

【摘要】：我国彩色茧丝蚕品种资源丰富,彩色茧丝具有保湿、抑菌、抗氧化、防紫外线等特性;而蚕蛹不仅富含蛋白质且含有多种活性物质及大量人体所需的微量元素。因此,茧壳和蚕蛹的开发日趋倍受关注。彩色茧中含有丰富的色素,主要来自桑叶,经蚕采食后,由中肠上皮细胞吸收后进入血淋巴,最后进入丝腺并在丝胶层积累,进而使茧丝着色。相关研究表明,家蚕绿茧系形成主要色素为黄酮类色素。本研究以不同茧色蚕品种为材料,检测蚕茧和蚕蛹中黄酮类化合物的含量,并通过高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC)分析蚕蛹中芦丁、槲皮素、异槲皮苷、紫云英苷和绿原酸的含量,这为更好地开发利用天然彩色茧和蚕蛹资源提供重要的参考。采用荧光定量PCR技术分析了不同品种五龄期家蚕中肠、脂肪体和丝腺中绿茧相关基因UGT86和UGT65以及黄茧相关基因CBP和Cameo1的表达情况,为探讨家蚕组织之间的色素差异及绿茧的形成机理,提供新的参考。主要的结果如下:1.白茧、黄茧和绿茧茧壳中的黄酮类化合物的含量分析绿茧茧壳中的黄酮类化合物的含量显著高于黄茧和白茧,并且绿茧系的茧色深浅与黄酮类化合物的含量高低直接相关。黄色茧壳中黄酮类化合物含量与白色茧壳之间不存在明显差异,甚至有少数黄色茧品种的茧壳中黄酮类化合物的含量低于白色茧品种的现象,说明并非所有彩色茧的茧壳中黄酮类化合物的含量都比白色茧高。2.白茧、黄茧和绿茧品种蛹中的黄酮类化合物的含量分析白色、黄色以及绿色3种茧色蚕蛹中的黄酮类化合物的含量介于2.00 mg/g~5.00 mg/g之间。绿茧蛹中黄酮类化合物的含量相对其他茧色的蛹虽然偏高,却未达到显著水平,但部分品种间蛹中黄酮类化合物的含量存在明显差异。同一家蚕品种蛹中黄酮类化合物的含量远远高于茧壳中的含量(1~10倍不等)。3.提供了一种利用HPLC检测家蚕蛹中黄酮类化合物的含量的方法检测蚕蛹中四种黄酮类化合物的色谱条件为:流动相由乙睛和甲酸组(A:0.05%H3PO4水溶液,B:乙腈),采用梯度洗脱,洗脱程序为:0~9min,B 20%~80%;9~12min,B 80%;12~12.1min,B 80%~20%;12.1~16min,B 20%;体积流量:0.8mL/min;进样量:20uL;检测波长:254nm;柱温:室温。本试验操作简单、快捷、灵敏度高,为蚕蛹在食用方面的开发提供了实用可靠的检测方法。4.不同茧色蛹中黄酮类化合物的分离及其鉴定通过HPLC检测家蚕蛹中芦丁、槲皮素、异槲皮苷、紫云英苷4种黄酮类化合物以及绿原酸的含量:本研究所检测的蚕蛹样品中均不含有绿原酸;不同茧色的蛹中总黄酮类化合物的含量不同,相同茧色不同品种蛹中黄酮类化合物的种类和含量也存在明显差异,绿色茧的蚕蛹中槲皮素、异槲皮苷含量较其他茧色的蛹较高,这两种黄酮类化合物可作为绿色茧的标记物;黄色茧的蛹不含或含有较低的芦丁。5.绿茧相关基因UGT86和UGT65及黄茧相关基因CBP和Cameo1的相对表达含量检测了不同茧色品种五龄幼虫中肠、丝腺和脂肪体中4个茧色相关基因的相对表达量,黄色茧品种CBP的表达相对较高,绿色茧品种UGT86的表达相对较高。而Cameo1和UGT65的表达水平与茧色形成并没有表现出明显的直接关系。幼虫阶段(5L3d)、蛹中期和蛹后期三个时期的脂肪体中都有CBP的表达,并且黄色茧显著高于绿色茧,尤其是进入蛹期后。UGT86基因在黄色茧的蛹不同时期脂肪体的表达呈现先上升后趋于稳定的现象,而绿色茧中则表现为先下降后趋于稳定的趋势。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S881.2

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