Let-7b通过下调靶基因EDA调控羊驼毛发生长的研究

发布时间：2019-11-23 08:33

【摘要】：羊驼被毛品质佳,耳部毛发主要以粗毛为主,生长周期长;背部以细毛为主,生长周期短。研究显示EDA信号通路在皮肤发育及毛发生长过程中有一定的调控作用。为了研究EDA对羊驼毛发生长的影响,同时从MicroRNA水平探索let-7b与EDA的靶向关系以及let-7b对EDA的调控关系,本实验以青年雄性羊驼为研究对象,首先利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测EDA在羊驼耳部、背部皮肤的表达差异,免疫组织化学定位EDA蛋白在羊驼耳部、背部皮肤的表达位置,从而探索EDA对羊驼毛发生长调控的作用;其次构建双荧光报告载体,验证let-7b与EDA的靶向关系;最后使用let-7b真核过表达载体转染羊驼皮肤成纤维细胞,检测转染后细胞中EDA的表达水平,旨在探索let-7b对EDA的调控作用方式。实验结果如下：(1)实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术结果显示EDA mRNA和蛋白水平在羊驼耳部皮肤相对表达量均显著高于背部皮肤(P0.01);免疫组织化学结果显示,EDA在羊驼皮肤毛囊的毛根鞘部位强阳性表达,毛基质弱阳性表达。数据分析得到耳部皮肤的平均光密度值高于背部皮肤,差异极显著(P0.01)。(2)双荧光素报告载体结果显示实验组荧光素表达量下降,表明let-7b与EDA具有明显的靶向关系。(3)let-7b真核表达载体转染羊驼皮肤成纤维细胞后,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术结果显示转染组中EDA mRNA表达量显著下降(P0.01),蛋白表达量也下降(P0.05)。细胞免疫组织化学结果显示：EDA在成纤维细胞质中大量表达,并且在转染的细胞中阳性反应比未转染细胞中弱。以上实验结果提示,EDA在羊驼耳部和背部皮肤毛发中差异表达,推测EDA对羊驼毛发的生长起到了一定的作用;EDA是let-7b作用的靶基因,且let-7b可能通过转录阻遏下调EDA mRNA和蛋白的表达。
【图文】：

３．２羊驼耳部和背部皮肤ＥＤＡ邋ｍＲＮＡ表达差异逡逑结果如图１－２Ａ：烙解曲线为单峰，表明扩增过程中无非特异扩增。根据２ＡＡｎ法逡逑得知ＥＤＡ在羊驼耳部皮肤表达量是背部的２．４２５倍，差异极显著（ＰＯ．Ｏｌ）（图１－２Ｂ）。逡逑Ｍｅｌｔ邋Ｃｕｒｖｅ逡逑ｒ菌ｉ柋Ｆ：邋ＩＩ青逡逑ｉ邋佭＂—P逡逑ｓ邋k＇0邋二；４转片吉＝逡逑？逦逦邋■邋ｉＸ逡逑＾邋＾邋－＇．．＇■■＇！邋＾—逡逑ｍ邋７０．０邋巧．０邋说．０邋的．０邋ｍ邋９５．０逡逑ｕｍ＼逡逑Ｔｃｔｎｐｅｆｆｌｔｕｒｅ（＊Ｃ）逡逑图１－２ＡＥＤＡ及１８ＳｒＲＮＡ基因溶解曲线逡逑Ｆｉｇ．ｌ－２Ａ邋ＰＣＲ邋ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ邋ｃｕｒｖｅ邋ｆｏｒ邋ＥＤＡ邋ａｎｄ邋１８Ｓ邋ｒＲＮＡ邋ｇｅｎｅ逡逑－１２－逡逑

图２－１邋ＥＤＡ蛋白在羊推耳部、背部皮肤中表达位置逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｌｏｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＥＤＡ邋ｐｒｏｔｅｉ打邋ｉｎ邋ａｌｐａｃａ邋ｅａｒ邋ａｎｄ邋ｂａｃｋ邋ｓｋｉｎ逡逑表２－１邋ＥＤＡ蛋白阳性反应物的平均光密度值逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－１邋Ｄａ拉邋ｏｆ邋ＥＤＡ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｒｅａｃ化ｎｔ邋ｍｅａｎ邋ｄｅｎｓｉｔｙ逡逑平均光密度值逡逑（Ｍｅａｎ邋ｄｅｎｓｉｔｙ）逡逑耳部（ｅａｒ）逦０．２９３化０．０３６９ａ逡逑背部（ｂａｃｋ）逦０．１５０８±０．０１１２？逡逑
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S829.9

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;毛用家畜的佼佼者羊驼[J];北京农业;2000年11期

2 郭瑞芬;毛用家畜的佼佼者羊驼[J];河北畜牧兽医;2000年08期

3 ;特养新秀:羊驼[J];农村实用技术与信息;2000年09期

4 王作洲,张新;羊驼——西部大开发可引进的新畜种[J];中国动物保健;2000年11期

5 ;毛用家畜的佼佼者—羊驼[J];当代畜禽养殖业;2001年07期

6 ;我国首次引进美洲羊驼[J];养殖与饲料;2002年04期

7 张巧灵;特养新品种——羊驼[J];农村新技术;2003年01期

8 张巧灵,董常生,贺俊平,赫晓燕;羊驼的消化系统及其对营养物质的吸收[J];动物科学与动物医学;2004年12期

9 农知;羊驼[J];农民科技培训;2004年10期

10 黄兴禄,赫晓燕,毕建敏,董常生;羊驼内脏的系统解剖学特征[J];动物医学进展;2005年09期

相关会议论文 前10条

1 ;羊驼生物工程实验室简介[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）[C];2012年

2 ;羊驼生物工程实验室简介[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（上）[C];2012年

3 江珊;董常生;;羊驼的起源、分类及进化[A];2013中国驼业进展[C];2013年

4 梁亚俊;邢娜;贺俊平;;羊驼简介以及经济价值[A];2013中国驼业进展[C];2013年

5 王婷;赫晓燕;;羊驼生物学特性[A];2013中国驼业进展[C];2013年

6 贺俊平;姜俊兵;董常生;;羊驼睾丸细胞凋亡及凋亡相关蛋白的定位[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年

7 温建新;李延鹏;单虎;;健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（上册）[C];2010年

8 赫晓燕;董常生;范瑞文;任玉红;张俊珍;;羊驼皮肤及毛的组织结构[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年

9 游蓉丽;董常生;贺俊平;赫晓燕;耿建军;田志英;文雪雪;;不同月龄羊驼小肠肥大细胞的数量变化研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

10 张巧灵;姜俊兵;张维军;贺俊平;赫晓燕;董常生;;显性白毛调控基因在不同毛色羊驼皮肤中表达差异的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 张瑛;羊驼经济价值高 市场前景好[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2007年

2 ;特养新品羊驼[N];中国畜牧兽医报;2007年

3 ;羊驼的开发利用与饲养技术[N];中国畜牧兽医报;2008年

4 ;毛用家畜的佼佼者羊驼[N];农民日报;2000年

5 ;羊驼的饲养[N];中国畜牧兽医报;2009年

6 通讯员张伟民 徐国胜;尼勒克欲建全国羊驼养殖基地[N];伊犁日报(汉);2010年

7 通讯员高超 徐成;尼勒克羊驼繁育基地不断壮大[N];伊犁日报(汉);2011年

8 本报见习记者 吴桂霞;神兽羊驼正传[N];广东科技报;2012年

9 本报驻新疆记者 宋铭宝;让珍稀羊驼伊犁河畔来安家[N];中华合作时报;2012年

10 通讯员 张伟民;尼勒克利用优势 发展羊驼养殖业[N];新疆科技报(汉);2012年

相关博士学位论文 前1条

1 田雪;不同毛色羊驼皮肤microRNAs的全基因组表达谱分析和功能研究[D];山西农业大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 牛芮;我国羊驼业发展的动力机制研究[D];山西农业大学;2015年

2 刘宁;Let-7b通过下调靶基因EDA调控羊驼毛发生长的研究[D];山西农业大学;2016年

3 许冬梅;羊驼壁外消化腺的组织学结构研究[D];山西农业大学;2004年

4 高莉;羊驼系统发育和种群内亲缘关系的研究[D];山西农业大学;2005年

5 陈明华;羊驼人工采精技术的建立及精液品质评价[D];山西农业大学;2005年

6 杜海燕;外源褪黑激素对羊驼春季绒毛生产性能的影响[D];山西农业大学;2005年

7 孙敏;不同精料蛋白质水平对羊驼日粮营养物质消化及生产性能的影响[D];山西农业大学;2005年

8 张巧灵;羊驼染色体核型的研究[D];山西农业大学;2003年

9 张俊珍;羊驼禽传染性支气管炎样病毒的研究[D];山西农业大学;2005年

10 姚建军;羊驼与绵羊第1胃室外流速率、微生物体外发酵与细菌区系的比较[D];山西农业大学;2015年

，

本文编号：2564874