抗盐基因Gm01g04890大豆子叶节遗传转化研究

发布时间：2019-11-24 05:37

【摘要】：利用根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化方法,将转录因子HD-Zip家族基因Gm01g04890分别导入测序品种Willimas 82(W82)和小粒豆品种东农50(DN50)两种大豆品种的子叶节中.探讨了种子萌发时间、农杆菌菌液浓度、侵染条件、共培养时间和乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对大豆子叶节形成不定芽的影响,优化了大豆子叶节遗传转化体系.T0代再生植株经草铵膦筛选以及RT-PCR检测,Gm01g04890基因已成功转入并整合于大豆基因组,获得了转Gm01g04890基因的DN50大豆抗性植株.
【图文】：

ｈ的种子，尤其是Ｗ８２品种，在经侵染共培养后存活下来的外植体个数较少，因而丛生芽诱导率也不高（图１）．２．１．２农杆菌菌液ＯＤ６００值对大豆丛生芽诱导率的影响当用于侵染的农杆菌菌液ＯＤ６００值为０．６时，两个品种的大豆丛生芽诱导率均达到最大，，大于６０％；当ＯＤ６００值为０．９时，丛生芽诱导率也均能达到５０％以上；当ＯＤ６００值为０．３时，丛生芽诱导率不到３０％，说明浓度较低的农杆菌菌液不利于丛生芽的形成（图２）．图１种子萌发时间对大豆丛生芽诱导率的影响Ｆｉｇ．１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ图２根癌农杆菌菌液浓度对大豆丛生芽诱导率的影响Ｆｉｇ．２Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ２．１．３侵染时间对大豆丛生芽诱导率的影响农杆菌菌液浓度相同的条件下，侵染外植体时间会影响丛生芽的诱导频率．本实验设计了３个不同的侵染时间：１５、３０、４５ｍｉｎ．结果表明，农杆菌侵染３０ｍｉｎ为两个品种的最佳侵染时间（图３）．Ｗ８２大豆品种在侵染４５ｍｉｎ时丛生芽诱导率也较高，说明侵染时间对Ｗ８２品种的丛生芽诱导率影响较小．２．１．４共培养时间对大豆丛生芽诱导率的影响农杆菌与外植体共培养时间的不同也会影响丛生芽的诱导率．与共培养１ｄ和５ｄ相比，共培养３ｄ两个品种的大豆丛生芽诱导率最高（图４）．共培

的影响当用于侵染的农杆菌菌液ＯＤ６００值为０．６时，两个品种的大豆丛生芽诱导率均达到最大，大于６０％；当ＯＤ６００值为０．９时，丛生芽诱导率也均能达到５０％以上；当ＯＤ６００值为０．３时，丛生芽诱导率不到３０％，说明浓度较低的农杆菌菌液不利于丛生芽的形成（图２）．图１种子萌发时间对大豆丛生芽诱导率的影响Ｆｉｇ．１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ图２根癌农杆菌菌液浓度对大豆丛生芽诱导率的影响Ｆｉｇ．２Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｓ２．１．３侵染时间对大豆丛生芽诱导率的影响农杆菌菌液浓度相同的条件下，侵染外植体时间会影响丛生芽的诱导频率．本实验设计了３个不同的侵染时间：１５、３０、４５ｍｉｎ．结果表明，农杆菌侵染３０ｍｉｎ为两个品种的最佳侵染时间（图３）．Ｗ８２大豆品种在侵染４５ｍｉｎ时丛生芽诱导率也较高，说明侵染时间对Ｗ８２品种的丛生芽诱导率影响较小．２．１．４共培养时间对大豆丛生芽诱导率的影响农杆菌与外植体共培养时间的不同也会影响丛生芽的诱导率．与共培养１ｄ和５ｄ相比，共培养３ｄ两个品种的大豆丛生芽诱导率最高（图４）．共培养时间过短会降低Ｔ－ＤＮＡ向外植体的转移效率，而共培养时间过长会造成农杆菌过量生长，外植体坏死，因此，选择共培养３ｄ作为两个大豆品４８第３０卷第１

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2565297