CTLA-4基因多态性与膀胱癌易感性的研究

发布时间：2020-03-23 16:39

【摘要】：膀胱癌(bladder cancer,BC)是常见的泌尿系统肿瘤恶性肿瘤之一,统计学显示其复发率、死亡率均较高,居泌尿系统肿瘤第一位。近年来世界范围内膀胱癌确诊病例数提高了1.5倍,我国范围内统计发现其发病人数逐年增加。环境因素和遗传因素参与了膀胱癌的发生和发展。细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T Lymphocyte-Associated Antigen-4,CTLA-4)基因位于染色体2q33上,表达产物为白细胞表面抗原CD152,通过与CD28竞争结合配体B7-1/B7-2,负向调节T细胞增殖与活化,降低机体抗肿瘤免疫反应,从而增加肿瘤的易感性。随着人类基因组学的发展,国内外研究诸多研究表明CTLA-4单核苷酸多态性(single nucleotide polymerphis-ms,SNPs)与肝癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤的遗传易感性密切相关;同时也有极少数国外研究显示与膀胱癌存在相关性。本研究旨在分析CTLA-4 CT60G/A、-1661A/G基因多态位点在四川地区汉族人群膀胱癌中的分布情况,探讨CTLA-4基因多态性与膀胱癌之间的风险关联强度。目的:通过对中国四川地区汉族人群CTLA-4 CT60 G/A、-1661A/G单核苷酸多态性(SNPs)位点分析,了解CTLA-4CT60 G/A、-1661A/G等位基因、基因型分布情况,探讨CTLA-4CT60 G/A、-1661 A/G位点单核苷酸多态性与膀胱癌遗传易感性及临床特征的关系。方法:采用病例-对照研究(case-control study),收集中国四川地区汉族膀胱癌患者241例(作为病例组),以及健康人群326例(作为对照组);采集研究对象的外周静脉血,提取全血DNA在引物引导下扩增目的基因,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术对CTLA-4 CT60G/A、-1661 A/G多态位点进行基因型分析(同时对DNA测序判型结果进一步验证明确),明确两组中CT60 G/A、-1661 A/G多态位点基因型及等位基因分布情况。采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析并探讨CT60 G/A、-1661 A/G多态位点与中国四川地区汉族人群膀胱癌易感性之间关系。用t检验或X2检验比较人口学特征,采用X2检验进行对照组人群Hardy-Weinberg遗传平衡检验;并以X2检验对病例组及对照组相应进行检验,比较基因型差异;以非条件logistic回归分析统计不同基因模型和膀胱癌的遗传易感性、临床特征、环境影响因素之间是否有联系,统计结果以比值比(odds ratio,OR)、95%可信区间(confidence interval,CI)表示,均以P0.05为有统计学意义。结果:1.两组间年龄、性别分布无统计学差异(P0.05);吸烟、饮酒在病例组和对照组中有显著统计学差异(P0.001,P=0.029)。2.通过对CTLA-4 CT60G/A、-1661A/G对照组群体进行遗传平衡定律检验,统计结果显示P0.05,两个基因位点差异无统计学意义,对照组群体人群基因型频率满足Hardy-Weinberg遗传定律平衡,对照组群体人群代表性良好。3.CTLA-4 CT60G/A位点基因型频率在两组的分布差异有统计学意义(X2=8.74,P=0.013),等位基因频率在两组的分布差异无统计学意义(X2=2.783,P=0.095);CTLA-4-1661A/G位点基因型频率在两组的分布差异有统计学意义(X2=7.689,P=0.021),等位基因频率在两组的分布差异有统计学意义(X2=7.360,P=0.007)。4.CTLA-4CT60G/A GG可使膀胱癌的患病风险增加1.239倍,OR(95%CI)为1.239(1.039,1.478),P=0.017,校正混杂因素(如性别、年龄、饮酒以及吸烟等)后OR(95%CI)为1.289(1.065,1.559),P=0.009。CTLA-4-1661A/G AG+GG可增加膀胱癌患病风险1.549倍,其OR为(95%CI)1.549(1.093~2.195),P=0.014;校正混杂因素(如性别、年龄、饮酒以及吸烟等因素)后OR(95%CI)为1.696(1.162~2.474),P=0.006;等位基因模型中,G等位基因型和A等位基因型比较,人群膀胱癌发病风险显著增加,OR(95%CI)为1.506(1.119~2.027),P值=0.007。5.在CTLA-4 CT60G/A显性基因模型下进一步分层分析发现在年龄≥65岁的人群中,AG+AA基因型增加膀胱癌的发病风险(P0.05);对是否吸烟进行分层分析,结果无统计学意义(P0.05);在CTLA-4-1661A/G显性基因模型下进一步分层分析发现按年龄分分层分析无统计学意义(P0.05);对性别进行分层分析,男性-1661A/G AG+GG基因型均有增加膀胱癌的发病风险(P0.05);对研究对象是否饮酒进行分层分析时,结果无统计学意义(P0.05)。6.非条件logistic回归分析时,通过校正吸烟、饮酒、性别、年龄等因素,CTLA-4 CT60G/A各个基因模型与膀胱癌临床分级、分期、转移之间无相关性,P值均无统计学意义(P0.05)。CTLA-4-1661A/G基因位点病例组中显性模型AG/GG基因型分别与膀胱癌分期、转移相关,OR、95%置信区间、P值分别为0.514(0.294~0.899)、P=0.02;0.415(0.212~0.812)、P=0.01。结论:1.CTLA-4 CT60 G/A位点基因型频率在病例组及对照组的分布差异有统计学意义(P0.05);Logistic回归分析显示:CT60G/A GG使膀胱癌患病风险增加1.239倍,P=0.017;A、G等位基因频率分布无统计学意义(X2=2.783,P=0.095);不同基因模型与膀胱癌临床分级、分期、转移之间无相关性(P0.05);故尚未发现CTLA-4 CT60G/A多态位点与膀胱癌遗传易感性相关。2.CTLA-4-1661A/G位点基因型频率在病例组及对照组的分布差异有统计学意义(P0.05);Logistic回归分析显示:-1661A/G AG+GG使膀胱癌患病风险增加1.696倍,P=0.014;G等位基因型和A等位基因型比较,人群膀胱癌发病风险显著增加(P=0.007);显性模型分别与膀胱癌分期和转移有统计学意义(P0.05)。故CTLA-4-1661A/G多态位点与四川地区汉族人群膀胱癌遗传易感性相关,AG/GG基因型可能与膀胱癌的分期、转移相关;
【图文】：

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无模糊干扰条带，，表明所扩增的 PCR产物具有较高的浓度，未扩增出其他无关干扰基因产物（见图1、2）。图 1：CTLA-4CT60G/A 基因多态位点 PCT-RFLP 酶切电泳图片Figure 1: CTLA-4CT60G/Apolymorphic site of PCT-RFLPmacrore-striction image1、2、4、6 为 GG 型（244bp+150bp）；3 为 AG 型（394bp+244bp+150bp)；5 为 AA 型（394bp）图 2：CTLA-4-1661A/G 基因多态位点 PCT-RFLP 酶切电泳图片Figure 2: CTLA-4-1661A/G polymorphic site of PCT-RFLPmacrore-striction image1、2、3、4、7、9 为 AA 型（347bp+139

酶切电泳,图片

图 2：CTLA-4-1661A/G 基因多态位点 PCT-RFLP 酶切电泳图片Figure 2: CTLA-4-1661A/G polymorphic site of PCT-RFLPmacrore-striction image1、2、3、4、7、9 为 AA 型（347bp+139bp）；5、6 为 AG 型（486bp+347bp+139bp)8 为 GG 型（486bp）
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14

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