人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血再灌注自噬及其相关基因Beclin-1、LC3、mTOR表达的影响

发布时间：2020-03-28 06:13

【摘要】：目的探讨在大鼠局灶性脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CIR)后,人参皂苷Rg1对哺乳动物雷帕霉素(mammalian rapamycin,m TOR)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、bcl-2同源结构域蛋白(bcl-2 homeodomain protein,Beclin-1)在各组别脑组织顶叶中的表达规律,在此基础上探讨人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血再灌注自噬损伤的调控。方法将健康的雄性大鼠随机分为四组,分别为假手术组(sham组)、模型组(IR组)、人参皂苷Rg1给药组(Rg1组)和人参皂苷Rg1加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)给药组(Rg1+3-MA组)。大鼠大脑局灶性缺血再灌注模型采用大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h再灌注24h的方法制备。通过观察各组间的神经功能缺损评分、脑组织含水量测定和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色结果鉴定模型是否成功。运用透射电镜观察各组别间大鼠脑组织神经元中的自噬情况;采用免疫荧光和免疫印迹定性定量检测各组间大鼠大脑顶叶m TOR、LC3、Beclin-1的表达。结果神经功能缺损评分结果示,sham组未见神经功能缺损症状;其余各组可见明显的神经功能缺损症状。脑组织含水量测定结果示,与sham组相比,其余各组的脑组织含水量明显增加。TTC染色结果示,sham组无梗死,其余各组可见明显苍白色梗死灶。与Rg1组相比,IR组和Rg1+3-MA组苍白色梗死灶体积明显增大。透射电镜结果示,sham组未见损伤的神经元形态;其余各组可见明显的神经元自噬。免疫荧光和免疫印迹结果示,IR组与Rg1+3-MA组无明显的差异。与sham组相比,其余各组间Beclin-1、LC3表达增加,m TOR表达降低,且在Rg1组中Beclin-1、LC3表达最高,m TOR表达最低。结论人参皂苷Rg1可能通过调节大脑顶叶Beclin-1、LC3和m TOR的表达水平,使脑组织细胞自噬水平上调,进而对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经元起到保护作用。
【图文】：

鉴定结果,脱氧酶,统计学意义,红色

组神经功能无明显差异。（二）TTC 染色脑梗死体积结果因大脑血流闭塞使脑组织出现或大或小的梗死是 MCAO 模型制备成功的标志。TTC 可与正常组织内的脱氧酶反应而使未缺血组织呈红色，但是缺血组织中的脱氧酶活性下降不能不能反应，故不能产生反应呈苍白色。图 1B 所示，Sham组 TTC 染色呈红色，无梗死；余下各组均有苍白色梗死灶。图 1C、表 1 示，与sham 组比，余下各组中的梗死体积增加，差异有统计学意义。与 IR24h 组、Rg1+3MA 组比，Rg1 组的梗死体积降低，差异有统计学意义。IR24h 组与Rg1+3MA 组梗死体积无明显差异。

自噬,自噬体,超微结构,电镜

14图 2 电镜下神经元中自噬的超微结构（箭头所示为自噬体）三、mTOR 蛋白在各组间的表达结果图 3A（免疫荧光结果）显示，在大鼠脑组织顶叶中 mTOR 的阳性表达位于神经元细胞质中，下图显示为明亮的绿色荧光。NeuN 标记神经元细胞核，下图显示为明亮的红色荧光标记。DAPI 标记细胞核，下图显示为明亮的蓝色荧光标记。结果(图 3C)显示，IR24h 组与 Rg1+3MA 组结果无统计学差异。与 sham 组比，IR24h 组、Rg1 组、Rg1+3MA 组表达降低，差异有统计学意义。与 Rg1 组比，IR24h 组、Rg1+3MA 组表达增高，差异有统计学意义。图 3B（免疫印迹结果）显示，，mTOR 在 sham 组呈现出较高的表达条带，在IR24h 组、Rg1 组、Rg1+3MA 组的表达条带减弱，其中在 Rg1 组的表达条带最
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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