敌磺钠在茭白中的残留及对相关抗病基因表达模式的影响

发布时间：2020-03-31 23:45

【摘要】：茭白植株与菰黑粉菌相互作用,形成了茭白可食用的肉质茎。研究发现喷施杀菌剂敌磺钠能够促进茭白肉质茎的提早形成。为了提高经济效益,农户往往喷施大量的敌磺钠。由于敌磺钠在茭白上并未登记使用,滥用现象存在很大的安全隐患。本实验室前期研究发现,茭白茎部膨大发育过程中,存在与抗病相关蛋白的表达变化。推测菰黑粉菌侵染茭白植株时,存在一些对茭白植株的生长发育及其孕茭具有极其重要作用的免疫反应,研究抗病相关基因在茭白膨大过程中的表达模式,为深入探讨茭白的孕茭机制提供理论基础。本实验试验材料为“浙茭2号”,建立了敌磺钠在茭白植株和茭白上的LC-MS/MS方法;通过敌磺钠在茭白上的田间试验,分析了敌磺钠在茭白植株上的消解动态规律和在茭白上的最终残留;结合杀菌剂敌磺钠消解动态和最终残留,分析了四个抗病基因的表达变化模式。结果如下:一、敌磺钠的LC-MS/MS方法建立了敌磺钠在茭白中的QuEChERS残留分析方法。经0.1%甲酸水/甲醇提取,PSA和C_(18)混合净化后,用LC-MS/MS测定。敌磺钠在2.5-100μg/L基质匹配标准溶液浓度范围内,呈良好线性关系,r~20.99。在0.05、0.1、0.25 mg/kg三个水平添加浓度下,茭白中敌磺钠的平均回收率为72.3%-75.5%,相对标准偏差(RSD)为8.3%-12.9%,茭白植株中敌磺钠的平均回收率为72.3%-76.1%,相对标准偏差(RSD)为7.9%-10.6%。敌磺钠的最小检出量均为2.5×10~-1111 g,最低检出浓度均为0.05 mg/kg。上述残留分析方法符合农药残留测定标准中对精密度和准确度的要求,且能够满足茭白植株和茭白中敌磺钠的残留分析要求。二、敌磺钠的消解动态和最终残留研究了敌磺钠在茭白植株中的消解动态规律。以1.5倍最高推荐剂量喷施茭白植株,敌磺钠在茭白植株中的半衰期为1.5 d,敌磺钠属于易降解农药(T_(1/2)30d)。最终残留试验结果表明,45%敌磺钠可湿性粉剂,有效成分用药量为405和607.5 g a.i./ha,施药间隔期为7 d,施药次数为2次和3次,距末次施药后7、14、21 d分别采样,收获茭白中敌磺钠的残留量为0.05-0.144 mg/kg。根据试验结果建议,45%敌磺钠可湿性粉剂在茭白上的最高用量为405 g a.i./ha,施药2次,安全间隔期为7 d。三、敌磺钠处理对茭白Zl-RPM1.1、Zl-RPM1.2、Zl-ADR和Zl-PR1基因的诱导表达分析敌磺钠喷施8叶期茭白植株后能够明显促进茭白孕茭,实验组比对照组提早5 d结茭,并具有明显的剂量效应。荧光定量PCR结果表明:敌磺钠喷施一周内逐渐消解,期间Zl-RPM1.1、Zl-RPM1.2、Zl-ADR基因的表达量逐渐上调,Zl-PR1基因的表达量反而下调,可能与茎部菰黑粉菌生长受到抑制后的恢复生长的刺激调节相关。敌磺钠最终残留分析中,Zl-RPM1.1、Zl-RPM1.2和Zl-ADR基因表达模式与处理浓度呈正相关,浓度越大,次数越多,基因诱导表达量越高,但当浓度过高时,基因的诱导表达不明显;Zl-PR1基因的表达模式差异明显,高剂量处理诱导表达量最高,可能与敌磺钠处理对茭白孕茭的调节作用相关。
【图文】：

生长调节剂的种类多达 20 多种[11]。浙江省农药鉴定管理所曾江省的茭白，检测数据显示，在 24 个样品中，有 16 个样品比 76.2%[8]。截止目前，在中国农药信息网上，茭白登记农药只维菌素、甲维盐、噻嗪酮、丙环唑、咪鲜胺[12]。因此，在茭现象十分普遍。磺钠简介及残留现状磺钠的简介钠（Fenaminosulf），全称对二甲基氨基苯重氮磺酸钠，是一广谱杀菌剂，又称敌克松 (Dexon)。1958 年由西德拜耳首次分子式：C8H10N3O3SNa，分子量：251.24。纯品为淡黄色结色无味粉末，约 200℃分解。25℃水中溶解度为 20～30 g/L；如二甲基甲酰胺、乙醇等，不溶于苯、乙醚、石油。水溶液呈解，可加亚硫酸钠使之稳定，，它在碱性介质中稳定[14]。

2 表 2.2 敌磺钠的离子对和碰撞电压Table 2.2 The MRM transition、collosion energe(CE) of fenaminosulf化合物compound母离子Parent ion（m/z）子离子Product ion（m/z）驻留时间Dwell time /s锥孔电压Cone voltage/V碰撞电压Collosionenergy /eV敌磺钠fenaminosulf251.90148.10* 0.165 28 6172.11 0.165 28 6注：*为定量离子2.3 结果2.3.1 敌磺钠色谱图在上述实验条件下，图 2.1 为敌磺钠的空白基质样品和 10 μg /L 基质加标样品总离子流色谱图，由图可以看出敌磺钠色谱峰形良好，保留时间适中，空白基质样品色谱图显示，敌磺钠无内源性杂质干扰。stem bract
【学位授予单位】：中国计量大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S481.8

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本文编号：2609735