21羟化酶缺乏症基因型与临床表型的关系及3种未报道突变讨论

发布时间：2020-05-09 15:45

【摘要】：目的:探讨130例21羟化酶缺乏症患儿的基因型及临床表型,了解西南地区儿童CYP21A2基因突变情况,分析3种未报道突变是否致病。方法:收集2012年11月至2017年3月期间就诊于重庆医科大学附属儿童医院的130例诊断21羟化酶缺乏症的患者为研究对象,在知情同意的原则下抽取患儿外周血2-5ml,突变检测以基因序列设计PCR引物,在实时荧光定量PCR仪上进行扩增,进行sanger测序,缺失及重复突变首先设计引物,后行PCR扩增及多重PCR,使用DHPLC分析。按照基因突变引起酶活性丧失严重程度分为A组(I2g、大片段缺失、Q318X、Q319X、E6Cluster)所形成的复合杂合突变或者纯合子突变,上述突变导致21羟化酶活性仅存0%-1%;B组为(I172N、I173N)组成的纯合子以及含有I172N或者I173N的复合杂合突变,这组患儿酶活性保留1%-10%左右,C组为(P30L、P31L、282L、V281L)组成的纯合子或含有以上几种基因型组成的复合杂合子,本组酶活性可保留20%-50%。未报道突变的致病性按是否满足生物学支持+遗传病学支持+临床特征,同时满足上述3条为致病性突变的可能性较大,需进一步行基因功能测定。结果:A组初诊年龄为0.07-0.17岁(26天-2 5/30月),中位年龄为0.12岁(1 15/30月),B组初诊为0.14-6.1岁(1 24/30月-6 2/12岁),中位年龄为3.4岁(3 5/12岁),C组初诊年龄为8-16岁,中位年龄为12.6岁(12 7/12岁),三组比较按年龄比较P值0.01,提示基因突变影响酶活性越严重,就诊年龄越小,就诊年龄可一定程度上预估疾病严重程度,A组中共90例患儿,其中84例为失盐型(93.3%),B组共34例患儿,4例为失盐型(11.7%),C组6例患儿无失盐型患儿,三组比较P值0.01,提示酶残留活性越低,失盐表现越明显,临床表型越重。本研究130例患儿中检测出30种不同的点突变(86.4%),大片段缺失与基因转换(4.1%)。点突变最常见的是I2g(36.50%),其次为I172N(7.76%),第三位是I173N(6.80%),其他依次为Q319X(5.90%),R357W(5%),R356W(4.10%),Q318X(2.70%)、单体型(1.8%)等。在失盐型中最常见的是I2g,其次是Q319X(5.90%),R357W(5%),R356W(4.10%),大片段缺失与基因转换(4.1%),单纯男性化患儿中检出率最高的是I172N,第二位为I173N,非典型患儿中,检出率最高的为P30L。检测出的3中未报道突变中,c.879_880insCCTGATCGGTGGGACT、M1R为致病性突变可能性极大,R149H为致病性突变的可能性较大,还需进一步行功能鉴定确诊。结论:基因型与临床表型有一定的联系,对指导临床工作及产前诊断有重要意义;130例患儿中最常见的突变为I2g(36.50%),其次为I172N(7.76%),第三位的是I173N(6.80%);本研究发现3种未报道突变,按照生物学意义+遗传学意义+临床特征吻合度同时满足可判断为致病性突变的标准,c.879_880insCCTGATCGGTGGGACT、M1R为致病性突变可能性极大,R149H及为致病性突变的可能性较大,但仍需进一步行功能鉴定确诊。
【图文】：

基因突变,男性化,羟化酶,非典型

图 1 21 羟化酶基因的定位Fig1 localization of 21 hydroxylase既往报道较常见的基因突变既往报道较常见的基因突变在有：失盐型常见有：IVS2(c.293-13 A/C)Gp.Q318X，p.R356W，8pb，，大片段缺失等，单纯男性化型常见的有 p.I172p.I136N,非典型型常见的有：p.P30L,P31L，V281L 及 V282L 等。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R725.8

【参考文献】