三丁酸甘油酯调控草鱼肠道PepT1基因表达的分子机理研究

发布时间：2020-05-16 08:48

【摘要】：本研究通过在体和离体实验,研究了三丁酸甘油酯通过转录因子CDX2和Sp1对草鱼肠道PepT1基因表达的调控作用,揭示了草鱼肠道PepT1基因的表达的调控机理。1)三丁酸甘油酯对草鱼肠道PepT1、CDX2及Sp1基因表达的影响研究养殖实验:本研究选取320尾初始体重为43.50±0.5g的草鱼,饲喂一周,然后进行4周的摄食生长实验。试验以添加0.0g/kg三丁酸甘油酯的日粮为对照组,以添加0.5 g/kg、1.0 g/kg、1.5g/kg三丁酸甘油酯的日粮为实验组,共4个处理组,每个处理组4个重复,每个重复20尾鱼。实验结果表明:(1)三丁酸甘油酯能够显著提高草鱼的增重率和特定生长率,促进草鱼的生长。处理组1.0g/kg的增重率和特定生长率明显高于对照组和其它处理组(P0.05)。(2)PepT1基因表达量随着三丁酸甘油酯的添加量的增加先升高后下降。处理组0.5g/kg PepT1、CDX2和Sp1基因的mRNA表达量均高于其它组。说明三丁酸甘油酯能够影响草鱼肠道PepT1、CDX2及SP1基因的表达。细胞实验:本研究培养了草鱼肠道细胞,向培养基中添加浓度分别为0mM、5mM、10mM、15mM以及20mM的三丁酸甘油酯,与培养液充分混匀,加入到六孔板的每个孔中,实验分成5个处理组,每个处理组4个重复,培养24h取样。结果显示,(1)草鱼肠道细胞呈圈形,连接紧密,排列整齐,呈铺路石状,细胞个体独立,边界明显,内有1~2个核仁。与鲫鱼肠道上皮细胞相似。(2)添加量为5mM的处理组PepT1、CDX2和Sp1 mRNA表达量最高,显著高于其他组(P0.05)。这揭示了三丁酸甘油酯也能够影响草鱼肠道细胞中PepT1、CDX2及Sp1基因的表达。由此可见,适量的三丁酸甘油酯能够提高草鱼的生长性能,并能提高草鱼肠道和肠道细胞PepT1、CDX2和Sp1 mRNA的表达,三丁酸甘油酯的剂量诱导同转录因子CDX2、Sp1和PepT1基因表达有协同作用,揭示三丁酸甘油酯可能通过转录因子CDX2、Sp1调控PepT1基因的表达。2)转录因子CDX2/Sp1对PepT1基因表达的调控研究(1)采用染色体步移技术(Genome Walking)技术克隆草鱼PepT1基因的启动子,利用生物信息学分析发现草鱼PepT1启动子上存在CDX2和Sp1的结合位点,揭示转录因子CDX2和Sp1可能调控PepT1基因的表达。(2)哺乳动物双杂交实验和亚细胞共定位,发现CDX2/Sp1共定位在细胞核,CDX2与Sp1存在相互作用。(3)构建PepT1启动子及CDX2和Sp1真核表达载体,通过荧光素酶报告基因实验,发现草鱼转录因子CDX2能够显著上调PepT1启动子活性(P0.05),Sp1对PepT1启动子调控作用不明显(P0.05),验证了草鱼转录因子CDX2/Sp1对PepT1基因表达有调控作用。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4

【参考文献】

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本文编号：2666477