人食道癌相关基因-4在心房颤动中的作用

发布时间：2020-05-27 09:03

【摘要】：目的:研究Ecrg4(人食道癌相关基因-4)在正常心脏的分布和潜在的生理功能,以及其在心房颤动患者和犬房颤模型中的表达情况,同时探讨Ecrg4在心房颤动中的作用及分子机理。方法:实验一:免疫组化及实时定量-PCR分析Ecrg4在心脏各部位表达情况:取9只SD大鼠的心脏,在显微镜下进行解剖,分别获取窦房结、房室结、左右心房、及左右心室组织,经免疫组织化学染色,在显微镜下观察Ecrg4在各解剖部位的表达情况,再将解剖好的各心肌组织进行总RNA分离和实时定量-PCR,检测Ecrg4在各心肌组织中的表达量。实验二:应用免疫荧光标记法检测乳鼠心肌细胞中,Ecrg4分别在左右心房肌细胞及左右心室肌细胞的表达情况,并在荧光显微镜下观察和拍片。实验三:将l3只犬随机分为两组,空白对照组5只,另外实验组8只运用心房快速起搏方法建立犬房颤模型,取犬心肌组织标本,免疫组化方法染色,并在显微镜下观察Ecrg4在房颤犬及正常犬心肌组织的表达情况,再将心肌组织进行总RNA分离和实时定量-PCR。实验四:分别获取5名年龄性别相匹配的窦性心律患者和持续性心房颤动患者的心耳组织,运用免疫组化方法染色,在镜下观察Ecrg4在心房颤动患者和窦性节律患者心耳中的表达情况并进行对比。实验五:采取siRNA技术来敲低新生乳鼠心肌细胞Ecrg4基因表达,并与野生型原代乳鼠的心肌细胞进行比较,分析动作电位时程,同时检测与炎症及心房重构有关基因的表达。结果:l.Ecrg4在心脏的左心房、窦房结里表达量最高,其次是右心房,而心室中的表达量较少,呈散发分布,差异具有统计学意义(P0.05)。2.心房肌细胞中检测到的Ecrg4定位在核周和内质网(ER)区域,拥有较强的Ecrg4阳性免疫荧光信号(绿色),然而心室肌细胞里能够发现Ecrg4定位在细胞质区间,显示微弱的均匀的免疫荧光(淡绿色)。3.与窦性心律的患者相比较,在持续性心房颤动患者的心耳中,Ecrg4的表达显著降低。4.同对照犬相比,快速起搏诱发犬房颤模型心房里,Ecrg4表达量显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。5.当敲低新生乳鼠心房肌细胞中的Ecrg4基因时,与未敲低Ecrg4基因的心房肌细胞比较,发现心房肌细胞的动作电位时程显著缩短,同时发现敲低Ecrg4基因会显著上调了促炎细胞因子白细胞介素-l(IL-la)、白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化蛋白-l(MCPl)的表达(P0.05),使基质金属蛋白酶-3(MMP3),重组人Sl00钙结合蛋白al(sl00al)和重组人Sl00钙结合蛋白a8(sl00a8)上调,差异具有统计学意义(P0.05),同时抑制了Gjal(缝隙通道蛋白-l)的表达(P0.05)。结论:l.Ecrg4在心房组织和心脏传导系统里的表达明显高于心室组织。2.与窦性心律患者比较,持续性心房颤动患者心耳组织中Ecrg4的表达量显著降低。3.犬房颤模型里,与对照组相比较,心房里Ecrg4的表达量显著降低。4.当敲低初生乳鼠心房肌细胞里的Ecrg4基因后,与未敲低Ecrg4基因的心房肌细胞比较,显著缩短了动作电位的时程、同时能抑制Gjal的表达、并激活炎症及心脏重塑相关基因的表达。
【图文】：

图 3Ecrg4 在乳鼠心肌细胞中表达图像显示相对较高水平的 Ecrg4（亮绿色）在乳鼠心内质网（A，左图）和相比较之下水平较低的 Ecrg4（淡胞的细胞质（B， 右图）。 比例尺= 50 微米

图 4 在持续性心房颤动患者的心耳中，Ecrg4 的表达5 例患有持续性房颤的患者（A，，左侧标记为 AFl-5），右侧标记为 SRl-5）右心耳标本。心房颤动患者的 细胞呈现浅棕色染色（低水平的 Ecrg4），而窦性心
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.75

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本文编号：2683295