WTAP基因对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和迁移侵袭能力的影响

发布时间：2020-05-27 12:56

【摘要】：随着乳腺癌早诊断、早治疗理念的推广,从1990年至2007年期间,乳腺癌的病死率降低了25%。尽管如此,乳腺癌仍然是在全球女性最常发生的恶性肿瘤之一,其中,中国每年新诊断乳腺癌的患者数目占全世界总患者数的12.2%。此外,近年来男性乳腺癌发病率也出现逐渐升高趋势。尽管许多靶向治疗药物已经被用于临床治疗,并且已经被证实疗效非常好,但是,靶向药物并不能用于所有类型的乳腺癌患者。目前,尚没有针对三阴性性乳腺癌有效的靶向治疗药物,而且三阴性乳腺癌对化疗敏感度低,因而该类型肿瘤预后很差。Wilm’s瘤1相关蛋白(WTAP)是一种可以与Wilm’s瘤1(WT1)基因特异性结合的蛋白。WT1是一个可以抑制肾母细胞瘤发生、发展的基因,并且在胚胎肾及性腺发育过程中起重要作用。WTAP和WT1主要分布于细胞核内与拼接因子部分共定位。在胚胎发育进程中扮演着异常重要的角色,并且广泛存在于许多肿瘤组织中,比如,乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌及肺癌。近年来,很多研究已经证明WTAP可以影响肿瘤的发生与发展过程。在胆管癌等肿瘤中WTAP均被证实有促进肿瘤增殖、转移的作用。但是,WTAP在乳腺癌细胞中功能尚未不清楚。本文将通过一系列实验来验证WTAP基因在乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭过程中所发挥的作用。目的:探究WTAP对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:用WTAP过表达和干扰慢病毒转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,用Real Time-PCR和Western blot检测WTAP基因的水平,用CCK-8评价MDA-MB-231细胞增殖能力的改变;通过迁移、侵袭和划痕实验检验该细胞系迁移和侵袭能力变化。结果:用MDA-MB-231完成了WTAP过表达(231-WTAP)和干扰的(231-shWTAP)细胞株的构建。在干扰组(231-shWTAP),WTAP mRNA水平及蛋白相对表达量均低于对照组(231-SCR),而过表达组(231-WTAP),WTAPmRNA水平及蛋白相对表达量均高于对照组(231-NC)(P0.01)。shWTAP组细胞增殖能力弱于SCR组,而WTAP组细胞增殖能力强于NC组(P0.01)。shWTAP组迁移和侵袭能力弱于SCR组,WTAP组迁移和侵袭能力均强于NC组(P0.05)。结论:WTAP能使乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭增强。我们将通过进一步深入研究WTAP在乳腺癌细胞中的具体作用机制,从而为三阴性乳腺癌的的临床治疗找到新的方向!
【图文】：

对照组,蛋白质,过表达,相对量

皖南医学院硕士学位论文结果1 稳定转染细胞系的构建成功构建稳转细胞系。过表达组用 231-WTAP 表示，过表达对照组用 231-NC 组表示，敲除组用 231-shWTAP 组表示，敲除对照组用 231-SCR 组表示。构建了稳转细胞系以后用嘌呤霉素筛选 3-5 代后用于细胞功能实验。2 实时荧光定量 PCR 检测 WTAPmRNA 水平用 MDA-MB-231 细胞提取的总 RNA 逆转录成 cDNA，以 -actin 为内参，通过实时荧光定量 PCR 检测 WTAPmRNA 水平，结果显示，，231-WTAP 组 mRNA 相对量高于 231-NC 组（P<0.01），而 231-shWTAP 组 mRNA 相对量低于 231-SCR 组（P<0.01）（如图 1）。

WesternBlot检测,对照组,细胞增殖,消化细胞

图 2、Western Blot 检测 WTAP 蛋白表达水平，与对照组比较，**P<0.014 WTAP 对乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 增殖能力的影响消化细胞铺 96 孔板，分别记录 24h,48h,72h,96h 的吸光度值（OD 值），从24 小时开始，231-WTAP 组细胞增殖速度明显加快，72 小时以后，三组细胞增殖速度逐渐减慢，与 231-SCR 组相比，231-shWTAP 组增殖能力明显下降（P<0.01），而 231-WTAP 组的增殖能力显著提高（P<0.01）（图 3）。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

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