锌对腭突融合期细胞凋亡的影响及与腭裂Sp家族候选基因研究

发布时间：2020-05-29 06:57

【摘要】：目的:通过本实验研究,认识到微量元素锌在腭突融合期对腭突组织发育的作用与影响,进一步筛选参与该过程的腭裂与正常发育腭突组织之间锌指蛋白Sp家族相关差异候选基因,以期为人类预防腭裂的发生提供理论依据。方法:1.用富锌饲料(含锌100 mg/kg)、常锌饲料(含锌30 mg/kg)、低锌饲料(含锌5 mg/kg)及缺锌饲料(含锌0 mg/kg)四种饲料分别喂养四组孕鼠。每组孕鼠各3只于ED14.5脱颈处死,取其胚胎头部进行石蜡包埋和石蜡切片的制作,分别进行苏木精-伊红染色观察腭胚突融合期腭突组织形态发育状况和TUNEL染色观察腭胚突融合期细胞凋亡情况。2.对富锌组、常锌组、缺锌组每组孕鼠各3只于ED14.5脱颈处死,取出胎鼠。在体视显微镜下,使用DEPC处理过的手术器械及器皿来分离腭突组织,随后用Trizol法提取腭突组织中total RNA。质检合格后送基因公司再次质检上样。通过安捷伦m RNA表达谱芯片杂交,收集三组基因表达情况并相互比较组间差异表达,采用2倍表达差异倍数对差异基因进行筛选并分析锌指蛋白Sp家族基因是否有表达差异。结果:1.富锌组腭突组织发育较好形成完整腭板,常锌组双侧腭突组织正在接触融合,低锌组双侧腭突组织上抬完成水平向靠近且距离较远,不能融合形成腭裂,缺锌组双侧腭突组织垂直向生长且发育短小,不能融合形成腭裂。2.富锌组腭板间质细胞内可见零星较少凋亡细胞,常锌组腭板内凋亡细胞稍高且集中在腭中缝及周围间质细胞的腭板中间区域,低锌组双侧腭突组织间质细胞可见较多凋亡细胞,缺锌组双侧腭突组织间质细胞可见大量凋亡细胞。3.富锌组相对于缺锌腭裂组2倍差异表达基因为663个,富锌组相对于常锌组2倍差异表达基因为97个,缺锌腭裂组相对于常锌组2倍差异表达基因为97个。4.富锌组相对于缺锌腭裂组2倍差异表达基因为663个,其中上调差异基因为513个,下调差异基因150个,在筛选出这些与腭裂相关的显著下调差异基因中,发现Sp5位于其中。富锌组Sp5平均表达量比缺锌腭裂组Sp5平均表达量低6.787452825倍,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.缺锌条件下腭突间质细胞的凋亡细胞最多且腭突组织发育较差,阻碍腭突组织的发育。富锌条件下腭中缝上皮提前消失,腭突间质细胞的凋亡细胞最少且腭突组织发育较好形成完整腭板,促进腭突组织的发育。微量元素锌在腭突融合期对于腭的发育起到关键的促进作用。2.锌指蛋白Sp5基因可能为腭裂Sp家族候选基因,Sp5对腭突组织的发育可能起到负性调控的作用。
【图文】：

图 1 ED14.5 胎鼠形态图Fig. 1 ED14.5 fetal mice form figure注：A 为存活胎鼠，B 为死胎胎鼠。Note:Ais a live fetal mouse , B is a stillborn fetal mouse.锌组、常锌组、低锌组、缺锌组形态学苏木精—伊红染色实锌饲养孕鼠，其子代胎鼠成活率为 100 %，ED 14.5 双侧腭板上抬完成图 2A）；常锌饲养孕鼠，其子代胎鼠成活率为 100 % ，ED 14.5 双侧完成并接近融合（图 2B）；低锌饲养孕鼠，其子代胎鼠成活率为 91.42 %板上抬且相距较远不能融合（图 2C）；缺锌饲养孕鼠，其子代胎鼠成%，ED 14.5 双侧腭板垂直向生长或正在上抬，双侧腭板无法融合（图

图 2 苏木精—伊红染色实验图片Fig.2 Hematoxylin - eosin staining experimental images注：A 为富锌组、B 为常锌组、C 为低锌组、D 为缺锌组ote：Ais the rich zinc group, B is the normal zinc group, C is the low zinc group, and D is the zinc deficien3 富锌组、常锌组、低锌组、缺锌组腭突组织细胞凋亡 TUNEL 图片ED 14.5，缺锌组和低锌组腭突组织形态较小，发育不佳，腭突间质组织胞较多（图 3C、D）；常锌组双侧腭板形态饱满，发育较好，双侧腭突组部位表面黏膜及周围组织细胞凋亡较多，正在融合过程中（图 3B）；富锌突组织融合完成形成完整腭板，，发育较佳，腭板组织内凋亡细胞较少（图
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R782.22

【参考文献】

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本文编号：2686569