温针灸治疗肾阳虚证膝骨关节炎的中医理论探讨及基因表达谱研究

发布时间：2020-06-04 14:47

【摘要】：目的:已有大量研究表明,温针灸治疗肾阳虚证膝骨关节炎(KOA)具有独特疗效。本研究的主要目的是在中医理论指导下,运用基因芯片技术,初步探讨温针灸疗法治疗肾阳虚证KOA在基因表达谱方面的分子生物学机制。方法:1.讨论分析中西医对KOA的认识;探讨KOA患者发病的分子机制,以及肾阳虚证KOA发病的中医病因病机。2.温针灸治疗肾阳虚证KOA的临床疗效观察:制定WOMAC疼痛量表和肾阳虚证量表,选取符合西医诊断标准的KOA,中医辨证为肾阳虚证的患者30例,根据肾阳虚证KOA发病的病因病机,以调节脏腑阴阳、温补肾阳、疏通经络为主要治疗原则,运用中医脏腑阴阳五行理论为指导选穴,用温针灸治疗两个疗程,共计10天,观察温针灸对肾阳虚证KOA的膝骨关节炎临床疗效和肾阳虚证的中医证候疗效。3.基因表达谱研究:采用基因芯片技术,采集患者治疗前后全血样本,并选取膝骨关节炎临床疗效和中医证候疗效典型的肾阳虚证KOA10例全血标本,同时选取正常健康人全血标本3例,分别对肾阳虚证KOA温针灸治疗前和治疗后、肾阴虚证KOA以及正常健康人作基因表达谱芯片数据分析研究,筛选差异表达基因。结果:1.目前现代医学对KOA的治疗缺乏彻底治愈的有效手段。KOA发病主要见于中老年人,以肾阳虚证多见,中医病因病机主要为:肾阳虚衰、外邪侵入、经络阻滞、脏腑气机不利。温针灸是治疗肾阳虚证KOA的主要有效手段之一。2.对肾阳虚证KOA30例患者进行温针灸治疗后,肾阳虚证KOA的膝骨关节炎临床疗效和肾阳虚证的中医证候疗效总有效率分别为93.33%、96.67%;WOMAC量表评分和肾阳虚证量表评分分析表明,肾阳虚证KOA患者治疗后,评分均显著降低(P0.01),疗效显著。整个治疗过程,病人接受度高,无不良反应。3.基因表达谱研究:(1)对肾阳虚证KOA治疗前与健康对照组基因表达谱芯片数据对比分析,共筛选到差异表达基因98个,其中70个表达上调,28个表达下调。差异基因GO富集分析主要涉及机体免疫应答、生物学过程调节、细胞过程等;KEGG信号转导通路分析筛选到21条信号通路,主要涉及自身免疫系统疾病、免疫功能等。(2)肾阳虚证KOA温针灸治疗后与治疗前基因表达谱芯片数据对比分析共筛选到52个表达下调基因,未筛选到表达上调基因。差异表达基因经GO富集分析,主要涉及细胞过程、代谢过程、离子结合和转运活性等;KEGG信号转导通路分析,主要涉及与衰老、代谢等相关信号通路,共计13条,包括p53信号通路、氮代谢信号通路等。结论:温针灸是治疗肾阳虚证KOA在基因表达谱方面的可能机制:第一,治疗前,肾阳虚衰,患者免疫力低下,和健康人相比出现免疫相关基因的表达差异,治疗后免疫力恢复,免疫相关基因表达改善,因此治疗后未能筛选到免疫相关基因;第二,肾阳虚衰可能影响到物质运输、物质代谢、能量代谢等,使物质转运受阻、物质代谢障碍、细胞能量匮乏,与之相关的基因表达通过负反馈调节处于一种异常增高的状态,通过温针灸治疗以后,当肾阳虚证得到缓解的同时,相关基因的表达出现下调;第三,治疗前,因为阳气不足,外邪入侵,正气奋起抗邪,处于正邪交争的状态,致使一些基因表达增强,当通过温针灸治疗后,正气恢复,外邪祛除,基因表达恢复正常;第四,有研究表明膝骨关节存在骨组织的过度衰老和凋亡,温针灸治疗可能通过下调SIAH的表达抑制p53诱导的细胞过度凋亡,从而达到治疗的作用。
【图文】：

箱线图,数据归一化,芯片,原始数据

规格扫描分辨率（μm）扫描区间 tiff 染料通道1×244K2×105K4×44K8×15K5 Scan Area(61 x21.6mm)20 bit Green1×1M2×400K4×180K8×60K3 Scan Area(61 x21.6mm)20 bit Green3 芯片实验结果及分析3.1 原始数据的归一化处理将实验得到的芯片原始数据由 R 软件中 limma 包进行归一化处理，对归一化的数据用箱线图（Box plot）来观察样本数据分布的整体特征。如图 1 所示：

聚类分析,火山

图 2 聚类分析图3.2 火山图结果分析火山图(Volcano plot)通过芯片数据进行组间比较，，筛选差异倍数（Foldchange 值）以及 t-检验得到的 p-value 来确定显著性差异的基因。火山图结果如图 3 所示纵坐标为-lg(P-value)值；横坐标为 log2(Fold Change)。正号（红色）代表基因的上调，负号（蓝色）代表基因的下调。X 轴平行线：p-value =0.05；Y 轴平行线：Fold Change=2。红色点区域：p-value
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R246.9

【参考文献】