桃CYP707A家族基因的克隆以及表达分析

发布时间：2020-06-07 14:30

【摘要】：从油桃‘中油四号’中克隆了3个CYP707A家族成员(PpCYP707A1、PpCYP707A2和PpCYP707A3)的全长,测序发现其CDS序列与桃基因组公布的序列一致。同源比对发现CYP707A家族在不同物种间具有高度的序列保守性,并且都含有CYP707A家族基因比较保守的血红素铁配位体半胱氨酸残基;系统进化树分析表明,PpCYP707A1与马铃薯CYP707A1、花生CYP707A1、菜豆CYP707A1、菜豆CYP707A2的亲缘关系较近,桃CYP707A2与拟南芥CYP707A2的亲缘关系较近,桃CYP707A3与拟南芥CYP707A4、花生CYP707A2的亲缘关系较近。荧光定量PCR分析表明,PpCYP707A1在茎中的表达量较高,PpCYP707A2在叶中的表达量较高,PpCYP707A3在花中的表达量较高,并且桃CYP707A家族一般在成熟组织中的表达水平要高于幼嫩组织。推测桃CYP707A家族成员交叉调控花芽休眠进程,并且发现花芽中的PpCYP707A2可以被ABA和GA诱导。原核诱导并纯化PpCYP707A1和PpCYP707A2蛋白可以为后续蛋白的功能鉴定奠定基础。
【图文】：

自然条件下花芽受制于环境条件还不能萌发,但是外界环境温度逐渐升高,因此这段时间为生态休眠期。由于低温下可以诱导ABA合成,ABA可以诱导CYP707A基因表达,因此为了更好的说明CY-P707A家族特异性参与花芽休眠的进程,我们以这段时间一年生树皮作为参照来研究CYP707A家族参与花芽休眠进程的调控。荧光定量显示(图6),PpCYP707A1于9月21日在花芽中的表达水平达到最高值,然后呈现逐渐降低的趋势;在一年生枝韧皮部中,其表达水平先降低、再升高、再降低,与在花芽中不一致,说明PpCYP707A1主要参与自然休眠前期的调控,但是图1桃CYP707A家族基因编码区全长的PCR扩增Fig.1AgarosegelelectrophoresisofpeachCYP707AgenefamilymembersA:PpCYP707A1全长扩增产物;B:PpCYP707A2全长扩增产物;C:PpCYP707A3全长扩增产物。

664植物生理学报图3桃CYP707A基因家族蛋白与其他物种CYP707A基因家族蛋白的系统进化树分析Fig.3PhylogenetictreeofpeachCYP707AgenefamilyandCYP707Agenefamilyproteinsofother图5油桃‘中油四号’花芽的休眠进程以及温度变化Fig.5Dormancystatusof‘Zhongyousihao’floralbudsandthechangesoftemperature图4桃CYP707A基因家族成员在不同组织的表达分析Fig.4ExpressionanalysisofCYP707Agenefamilymembersindifferenttissues

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