BCL11B基因座位在细胞核内的空间组织及其功能性研究

发布时间：2020-06-25 08:07

【摘要】：白血病(Leukemia)是一种造血系统高发性恶性肿瘤,也是小儿患者中最常见的恶性肿瘤。雷帕霉素治疗白血病有一定的疗效。BCL11B(B-cell lymphoma/leukemia 11B)属于BCL家族,是一种非常重要的转录调控因子。BCL11B基因参与胸腺发生、T细胞增殖和分化等生物过程,同时也调控淋巴造血系统发育,增殖。其缺失容易产生辐射诱导白血病的发生。染色质构象俘获(chromosome conformation capture 3C)技术研究细胞核内的染色质空间组织,同时也可以研究远距离DNA分子间的相互作用。染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation ChIP),是现阶段作为研究DNA-蛋白质间的相互作用的一种有力工具。当3C、ChIP及甲醛辅助分离调控元件(Formaldehyde-assisted isolation of regulatory elements FAIRE)技术、组蛋白修饰技术相结合时,可以促进人们对细胞核内部结构的认识,细胞核染色质间的相互作用是复杂多样的,而这些技术可以帮助我们来研究染色质间的相互作用。本研究利用3C、ChIP及甲醛辅助分离调控元件(FAIRE)等技术方法,可以从三维水平上认识雷帕霉素对T细胞急性白血病细胞内BCL11B基因座位动态空间组织的影响,进而研究BCL11B基因在T细胞急性白血病细胞内表达调控的分子机制。目的:研究雷帕霉素对T细胞急性白血病细胞内BCL11B基因座位动态空间组织的影响,进而研究BCL11B基因在T细胞急性白血病细胞内表达调控的分子机制。方法:1.细胞常规培养条件下,细胞生长处于对数增长期时,选取合适浓度的雷帕霉素处理CD4+T细胞(Jurkat细胞),用MTT测定细胞活力。2.通过荧光定量PCR(qPCR)、Western Blot检测Jurkat细胞用不同浓度雷帕霉素处理24 h后相关基因的转录水平及蛋白表达水平。3.通过3C技术研究Jurkat细胞用雷帕霉素处理前后,BCL11B基因座位内位点间的相互作用的变化。4.通过FAIRE技术研究Jurkat细胞用雷帕霉素处理前后,BCL11B基因座位开放区位点之间的变化。5.通过ChIP技术研究Jurkat细胞用雷帕霉素处理前后,BCL11B基因座位与CTCF蛋白相关位点之间的相互作用的变化。6.通过ChIP技术研究Jurkat细胞用雷帕霉素处理前后,BCL11B基因座位上组蛋白修饰水平变化。结果:1.通过MTT活力测定结果显示,雷帕霉素能抑制Jurkat细胞的增殖活力,抑制程度与药物浓度呈正相关;Jurkat细胞用雷帕霉素处理后,BCL11B与CTCF的转录水平及表达水平均不同程度上调。2.3C研究证明了BCL11B基因座位各位点间存在相互作用的关系,并且雷帕霉素激发了Jurkat细胞BCL11B空间组织动态变化。3.FAIRE对BCL11B基因座位各位点的富集效率不同,且雷帕霉素激发了Jurkat细胞BCL11B基因座位活跃性。4.雷帕霉素影响了Jurkat细胞CTCF与BCL11B基因座位结合的频率。5.雷帕霉素影响了Jurkat细胞BCL11B基因座位上组蛋白修饰水平。结论:雷帕霉素处理改变了Jurkat细胞内的表观遗传环境,进而激发了BCL11B基因座位的空间组织变化,BCL11B基因座位这种空间组织的变化在功能上调控了基因的表达。
【学位授予单位】：海南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.7
【图文】：

抑制率,细胞的,雷帕霉素

床孵育 PVDF 膜 1 h。（12）曝光照相：取出 PVDF 膜，用 TBST 中洗涤 6 次，每次 5 min。将 A、B 工作液按 1:1 混匀（见超敏 ECL 化学发光试剂盒说明书）滴于膜上，曝光照相。1.3 实验结果1.3.1 雷帕霉素抑制 Jurkat 细胞的增殖活力Jurkat 细胞常规条件下培养至细胞对数生长期，96 孔板铺板，用计数板计数，使每孔细胞数控制在10000个左右，Jurkat 细胞经过不同浓度雷帕霉素处理24 h，根据测得的 OD 值计算出抑制率，结果用 GraphPad Prism 5 软件制图，如图 1.1所示，细胞增殖活力明显抑制，并且随着药物浓度的增加，细胞活力抑制程度明显增加。实验结果用 SPSS 软件做统计学分析，p<0.05，具有统计学意义。实验结果说明雷帕霉素抑制 Jurkat 细胞的增殖。

雷帕霉素,总RNA提取,Jurkat细胞,细胞

海南医学院硕士学位论文at 细胞不同浓度雷帕霉素处理后相关基因的转录水平上细胞常规条件下培养至细胞对数生长期，用 0、10 ng/m雷帕霉素处理 Jurkat 细胞 24 h 后，收集细胞，提取总 RRNA 进行用凝胶电泳分析，如图 1.2 所示，可见两条明提取效果较好，无明显降解，进一步进行反转录，得到

【相似文献】