结肠癌肝脏转移相关SMC1A基因剪切转录本之间的内源性竞争调控关系分析

发布时间：2020-07-01 16:32

【摘要】：背景:结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,在西方国家,其发病率位居肿瘤第2位,在我国居恶性肿瘤第3位。在结肠癌微转移灶形成早期,SMC1A基因就已经启动了高表达。SMC1A在结肠癌肝脏转移灶组织中的表达显著高于结肠癌原发灶组织和正常肠黏膜。SMC1A基因位于X号染色体上,通过选择性剪切产生六个转录本,其中只有SMC1A-001和SMC1A-201可以翻译出成熟蛋白产物。同一基因的不同剪切异构体之间可以通过竞争性内源调控的方式,在转录后水平影响该基因最终的mRNA产物水平。目的:为了研究SMC1A基因剪切转录本之间的内源性竞争调控关系,以及不同转录本的功能差异。方法:分别合成SMC1A转录本001和201的过表达载体,转染野生型RKO细胞,通过细胞划痕试验、Transwell试验和细胞因子检测比较两者转移能力差异。分别合成SMC1A转录本002、003、004、005的过表达载体,转染野生型RKO细胞、突变型RKO细胞、HCT116细胞、SW480细胞与SW620细胞后,提取ⅡRNA,通过荧光定量PCR验证过表达效果。确认成功过表达后,再次提取RNA,采用荧光定量PCR分别检测不同转录本过表达后001和201的表达情况。结果:第一、在第24h和48h时过表达SMC1A-201组和过表达SMC1A-001组细胞的迁移距离均显著大于过表达阴性对照组。过表达SMC1A-201组和过表达SMC1A-001组细胞迁移能力明显提高,但SMC1A-001组比SMC1A-201组迁移能力要高。过表达SMC1A-001组细胞分泌SDF-1,IL-6因子的能力更强。第二、野生型RKO细胞中,002、004、005过表达24、48h后,201的表达和空载组对比没有显著差异,但003过表达后,24、48h后201的表达都显著增加。野生型RKO细胞中,002、003、004、005转录本过表达48h后001的表达量均高于各转录本过表达24h后,其中003过表达后001的表达增加最明显。突变型RKO细胞缺少201的表达,与野生型RKO细胞组相比,突变型RKO细胞中各转录本过表达后,除了 004过表达组,其他各组001的表达量在48h也比24h更高,趋势和野生型RKO细胞内相似。第三,在HCT116和SW620细胞中,各转录本的过表达趋势与野生型RKO细胞内的有所差异,而SW480细胞中各转录本的过表达趋势则与野生型RKO细胞中的相似。结论:SMC1A基因不同转录本之间存在着功能差异,SMC1A转录本001可使肿瘤转移潜能明显增加,而SMC1A转录本201促进肿瘤转移的潜能则相对较弱。在RKO细胞和SW480细胞中,SMC1A转录本003对转录本001和201的表达有调控作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.35

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