乌菜CBF1基因转化番茄与拟南芥及其功能验证

发布时间：2020-07-08 00:43

【摘要】：本试验以乌菜CBF1基因、番茄和拟南芥为研究对象,利用农杆菌介导法,将前人已构建好的乌菜CBF1基因植物表达载体pBI121-CBF1导入番茄材料NT-15-G1-3和拟南芥中。获得了转CBF1基因拟南芥植株,测定其在低温胁迫下的生理生化反应。以期为深入研究乌菜CBF1基因的功能奠定基础,本试验的主要研究结果如下:1)以番茄材料NT-15-G1-3子叶为外植体,采用子叶高频再生法。通过对再生培养基中的激素配比进行差异分析得到,番茄材料NT-15-G1-3子叶分化不定芽的最适培养基为:MS+8g/L琼脂+30g/L蔗糖+2.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA;最适不定芽诱导生根的培养基为:MS+8g/L琼脂+30g/L蔗糖+0.1mg/LNAA,其不定芽分化率与生根率分别为80.00%、80.00%。2)利用农杆菌GV3101介导的方法,将乌菜CBF1基因导入番茄和拟南芥。取收获的T0代拟南芥种子进行卡那霉素抗性筛选,获得6株抗性植株,对筛选得到的植株进行PCR检验,均获得目的条带,初步证明CBF1表达载体已导入拟南芥基因组中;通过半定量RT-PCR鉴定,结果显示乌菜CBF1基因在转基因拟南芥中得到了表达。但对得到的转基因番茄进行PCR检验,却未得到目的条带,这一问题有待进一步研究。3)为鉴定乌菜CBF1基因过表达对转基因拟南芥抗寒性影响,本试验对野生型拟南芥和转基因拟南芥进行4℃低温胁迫处理7d,测定叶片MDA、脯氨酸与可溶性糖含量及SOD活性。结果表明,在低温胁迫下,与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥的MDA含量明显低于野生型拟南芥,脯氨酸含量以及可溶性糖含量均明显上升,SOD维持较高活性,说明转基因植株电解质外渗量较少,膜脂过氧化程度较低,有利于维持细胞的膜结构与功能,缓解低温造成的伤害,从而增强植株的抗寒能力。
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S634;S641.2
【图文】：

4.1.3 再生植株的获得选用最适激素浓度配比的培养基获得再生植株，移栽于混有营养土与蛭石的营养钵中，水浇透，正常条件下培养。愈伤组织诱导、不定芽分化、不定芽生根和再生植株移栽的情况见图 4-1、图 4-2、图 4-3 和图 4-4。

4.1.3 再生植株的获得选用最适激素浓度配比的培养基获得再生植株，移栽于混有营养土与蛭石的营养钵中，水浇透，正常条件下培养。愈伤组织诱导、不定芽分化、不定芽生根和再生植株移栽的情况见图 4-1、图 4-2、图 4-3 和图 4-4。

图 4-2、图 4-3 和图 4-4。图 4-1 诱导愈伤组织Fig 4-1 Induced callus图 4-2 不定芽分化Fig 4-2 Adventitious bud differentiation

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本文编号：2745851