细叶百合LpSVP基因的克隆及其对烟草的遗传转化

发布时间：2020-07-08 07:11

【摘要】：细叶百合花被片反卷,花朵娇艳,是一种分布区域极广的野生花卉。其适应性强,极耐寒、耐旱、耐盐碱,既可用作园林绿化美化环境,同时也是一种名贵的切花材料。本研究从细叶百合转录组测序文库中筛选MADS-box转录因子家族,选择表达量高、开放阅读框完整并具备保守结构域,采用同源序列方法克隆基因全长,该基因编码224个氨基酸。序列同源性和系统进化树分析表明该基因属于MADS-box基因家族下SVP类基因,命名为LpSVP。实时荧光定量分析表明在花发育过程中该基因表达量先增长后下降,推测其对细叶百合花发育过程具有表达调控作用。本文主要研究结果如下:1.通过花芽分化形态观察发现,细叶百合鳞茎在低温贮藏期间发生花芽分化现象,并且随低温贮藏时期的延长花芽分化程度加深;荧光定量分析LpSVP基因相对表达量随低温贮藏时期延长持续下降,推测该基因作为花分生组织识别阻遏物,其下调表达响应花芽分化进程。2.该基因ORF全长为675bp,具有高度保守的MADS区和半保守的K区,属于MADS-box基因家族。该序列与台湾百合和麝香百合杂交品种(Liliumformosanumx Liliumlongiforum)的SVP蛋白同源性达到99%。生物信息学分析表明蛋白相对分子量为25.783kDa,理论等电点为5.62,为亲水蛋白,没有跨膜结构。3.采用RT-PCR对LpSVP进行组织特异性表达分析,结果表明LpSVP在细叶百合鳞茎、叶片、花瓣、雄蕊、雌蕊中都表达,但有强弱之分。4.选取细叶百合花发育5个阶段,即花蕾Ⅰ期,花蕾Ⅱ期,花蕾Ⅲ期,花蕾末期和盛开期进行qRT-PCR分析,LpSVP表达量呈现先增长后下降的趋势,在花蕾Ⅱ期表达量最大,在盛开期表达量最低。5.构建植物表达载体pBI121-LpSVP-GFP,通过农杆菌介导的叶盘转化法将pBI121-LpSVP-GFP转入野生烟草中,结果表明转基因株系相较野生型开花时间推迟,花序分支变多,整体花序略为疏散。
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S682.29
【图文】：

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本文编号：2746251