晚期非小细胞肺癌不同转移患者血浆EGFR基因突变的表达及临床意义研究

发布时间：2020-07-10 12:15

【摘要】：第一部分晚期非小细胞肺癌患者血浆EGFR基因突变状态与患者不同转移相关性的研究目的分析晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)不同转移患者血浆表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变情况,并分析EGFR突变与晚期NSCLC临床参数的相关性,为阐明晚期NSCLC不同转移患者的EGFR突变特点及探讨有效的防治策略提供理论依据。方法1.收集2015年1月-2017年12月山东大学齐鲁医院和聊城市人民医院收治的105例晚期NSCLC患者,采集清晨空腹全血10ml,乙二胺四乙酸二钾(ethylene diaminetetraaceticacid-K2,EDTA-K2)抗凝,血液采集后 2 小时内离心(2,000g,10 min)分离血浆,-80℃保存。收集其中24例接受手术治疗或穿刺活检患者的肿瘤组织标本,保存于-80℃低温冰箱。2.利片用血浆、组织DNA分离试剂盒提取血浆及组织中DNA,扩增阻滞突变系统聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,ARMS-PCR)方法检测血浆及组织中 EGFR 基因(19-Del、21-L858R和20-T790M)突变情况,比较血浆和组织EGFR突变检测的一致性。分析105例晚期NSCLC不同转移患者血浆EGFR基因突变情况,应用χ 2检验分析EGFR基因突变与临床资料的相关性,P0.05认为具有统计学意义。结果1.血浆和组织EGFR突变具有一致性:24例晚期NSCLC患者血浆EGFR总突变率为41.6%(10/24),组织EGFR总突变率为50.0%(12/24)。血浆EGFR 19-Del 突变率为12.5%(3/24),EGFR 21-L858R 突变率为 29.17%(7/24),EGFR 20-T790M 突变率为 0%(0/24)。组织 EGFR 19-Del 突变率为 16.67%(4/24),EGFR21-L858R 突变率为 33.33%(8/24),EGFR 20-T790M 突变率为 0%(0/24)。血浆和组织EGFR突变检测结果一致性为71.43%。2.骨转移组和胸膜转移组血浆EGFR 21-L858R突变率高于EGFR19-Del和20-T790M:晚期NSCLC患者淋巴结转移组、骨转移组、胸膜转移组、脑转移组 EGFR 突变率分别为 15.15%(5/33),43.59%(17/39),45.00%(9/20),69.23%(9/13)。其中骨转移组EGFR21-L858R突变率明显高于EGFR19-Del(P=0.021)和20-T790M(P=0.003);而胸膜转移组EGFR突变类型主要是EGFR 21-L858R,其突变率明显高于 EGFR 19-Del(P=0.038)和 20-T790M(P=0.0075);脑转移组EGFR 19-Del和21-L8581R突变率未见明显差异(P0.05);淋巴结转移组EGFR各突变类型突变率之间无明显差异(P0.05)。3.EGFR突变与患者临床参数具有明显相关性:EGFR突变与患者性别、脑转移具有相关性:女性患者EGFR突变率(63.64%)明显高于男性患者(21.31%)(P0.001),脑转移组EGFR突变率(69.23%)高于非脑转移组(33.70%)(P=0.014);EGFR 19-Del突变与患者临床分期、脑转移具有相关性:临床Ⅲ期NSCLC患者EGFR 19-Del突变率(2.41%)低于临床Ⅳ期NSCLC患者(45.45%)(P=0.001),脑转移患者中EGFR 19-Del突变率(38.46%)高于未发生脑转移患者(7.61%)(P=0.001);EGFR21-L858R突变与患者性别具有相关性:男性患者中EGFR 21-L858R突变率(9.84%)低于女性患者(47.73%)(P=0.001)。结论血浆EGFR突变检测结果与组织一致性较高,对于无法获得足够组织标本进行EGFR突变检测的晚期NSCLC患者,血浆检测可以成为检测EGFR突变的替代方法。EGFR19-Del突变、21-L858R突变与晚期NSCLC临床病理特征的相关性提示EGFR19-Del突变、21-L858R突变可能作为预判晚期NSCLC转移的标志物,并为晚期NSCLC患者的个体化治疗策略提供理论参考。第二部分晚期非小细胞肺癌不同转移患者血浆EGFR突变与血清肿瘤标志物的相关性研究目的分析晚期NSCLC不同转移患者的临床参数、EGFR基因突变、血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原 125(carbohydrate antigen 125,CA125)、细胞角蛋白片段 21-1(cytokeratin fragment 211,CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(neuronen-spezifischeenolase,NSE)和唾液酸(sialic acid,SA)肿瘤标志物的关系,探索血清中肿瘤标志物能否用于预判晚期NSCLC转移和EGFR突变类型。方法1.标本采集:采集患者空腹静脉血5 ml置于真空采血管,待血液充分凝固后,3,000r/min、10min离心分离血清,-80℃冰箱保存。2.采用电化学发光免疫分析技术检测2015年1月-2017年12月山东大学齐鲁医院和聊城市人民医院收治的105例晚期NSCLC患者血清CEA、CA125、CYFRA21-1、NSE 和 SA 水平。3.EGFR各突变类型组、各转移组血清肿瘤标志物浓度用中位数(四分位数)表示,采用Mann-Whitney U检验进行两组数据间血清肿瘤标志物的比较;采用Kruskal-Wallis检验进行多组数据间的比较。结果1.骨转移组血清CEA水平明显高于胸膜转移和脑转移组:通过比较不同转移组间各血清肿瘤标志物水平,发现骨转移组血清CEA水平(57.180 ng/ml(11.000,166.590))明显高于淋巴结转移组(22.720 ng/ml(6.760,35.410)),胸膜转移组(18.560 ng/ml(11.800,71.040))和脑转移组(8.450 ng/ml(3.510,50.550))(P=0.031),胸膜转移组和脑转移组血清CEA水平高于淋巴结转移组,但差异不具有统计学意义(P0.05);而淋巴结转移组、骨转移组、胸膜转移组、脑转移组的CA125水平未见明显差异(P0.05);各转移组间CYFRA21-1未见明显差异(P0.05);各转移组问NSE水平亦无明显改变;此外各组间SA水平未检测到明显改变(P0.05)。2.EGFR 21-L858R突变组血清CEA水平升高:EGFR突变组CEA(29.26 ng/ml(14.98,163.88))水平明显高于未突变组(16.68 ng/ml(6.48,43.38))(P=0.006)。进一步分别对EGFR不同突变类型和血清肿瘤标志物的关系分析显示:EGFR21-L858R 突变组血清 CEA 水平(62.89ng/ml(15.64,166.34))高于未突变组(16.68 ng/ml(6.48,43.38))(P=0.003),而EGFR21-L858R突变组与未突变组CYFRA21-1、CA125、NSE、SA水平无明显差异(P0.05);此外,EGFR 19-Del突变组与未突变组相比,CEA、CYFRA21-1、CA125、NSE、SA水平无明显差异。3.骨转移EGFR突变组和胸膜转移EGFR突变组血清CA125水平高于脑转移EGFR突变组:我们对EGFR突变的41例晚期NSCLC患者按不同转移进行分组,比较各组血清肿瘤标志物的水平,发现骨转移EGFR突变组和胸膜转移EGFR 突变组血清 CA125 水平分别为(47.450 U/ml(25.998,103.025)和(66.300 U/ml(38.250,132.450))明显高于脑转移 EGFR 突变组(19.900 U/ml(8.725,30.230))(P=0.027);而 CEA、CYFRA21-1、NSE、SA肿瘤标志物浓度在不同转移部位EGFR突变组之间未见明显差异(P0.05)。结论骨转移组血清CEA水平高于胸膜转移组和脑转移组,并且血清CEA与晚期NSCLC患者EGFR 21-L858R突变相关,提示血清CEA可能作为预判晚期NSCLC骨转移和预测患者EGFR 21-L858R突变的潜在标志物;骨转移EGFR突变组和胸膜转移EGFR突变组血清CA125水平分别高于脑转移EGFR突变组,提示发生骨转移或胸膜转移的晚期NSCLC患者,CA125升高提示发生EGFR突变的可能。但CEA和CA125作为预判晚期NSCLC转移和EGFR突变类型的潜在标志物应用于临床的可行性仍需进一步验证。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

【参考文献】