IKZF1基因在急性B淋巴细胞白血病复发克隆演化中的表达及意义研究

发布时间：2020-07-13 16:21

【摘要】：研究背景:儿童急性B淋巴细胞白血病(BCP-ALL)目前已经成为可以治愈的血液肿瘤典范;与之形成对比的是,成人BCP-ALL整体预后仍然较差,长期生存仅为50%左右;克隆演化是白血病治疗耐药、疾病复发的重要原因。锌指蛋白家族成员IKZF1基因是正常B淋巴细胞分化、发育和成熟的重要调节因子;近年研究发现,IKZF1基因缺失在BCP-ALL发病机制中扮演重要角色,其编码的Ikaros蛋白是正常B淋巴细胞分化、发育和成熟的关键调控因子;IKZF1基因缺失是费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)和费城样急性淋巴细胞白血病(Ph-like ALL)中常见的典型分子遗传学特征,在BCP-ALL中具有独立预后意义;但IKZF1基因在BCP-ALL治疗前后,特别是疾病复发的克隆演化中的表达及意义,目前尚不完全清楚。研究目的:(1)检测分析IKZF1基因在初发和复发BCP-ALL中的突变比例及亚型分布;(2)分别分析IKZF1基因缺失在初发和复发BCP-ALL中的预后意义;(3)追踪分析患者初发和复发时配对标本中IKZF1基因缺失的变化,探索其在BCP-ALL复发克隆演化中的意义。研究内容及方法:收集104例2011年9月至2017年8月南方医科大学南方医院血液科成年BCP-ALL患者初发DNA标本,采用GAP-PCR检测IKZF1基因外显子缺失,分析IKZF1基因在我国成人BCP-ALL中的缺失分布;回顾性分析IKZF1基因突变与BCP-ALL患者临床特征和预后的关系;筛选其中45组患者初诊-复发配对标本,分析IKZF1基因缺失的变化。研究结果:(1)在初发BCP-ALL患者中,IKZF1基因外显子缺失总体检出率为40.4%(42/104),初发Ph+ALL亚组检出率显著高于Ph-BCP-ALL亚组(57.6%vs17.8%,p0.001);在复发患者中,IKZF1基因缺失率为51.1%(23/45),主要缺失亚型包括 A4-7(n=17)、A2-7(n=3);复发 Ph+ALL 亚组,IKZF1基因缺失检出率65.2%(15/20),显著高于费城阴性亚组(65.2%vs34.8,p=0.004),主要缺失亚型为 A4-7(n=5);(2)采用SPSS统计软件,根据初诊时IKZF1基因缺失亚组与非缺失亚组进行分析,两组无进展生存率(PFS)和总生存率(OS)均无显著性差异;Ph+ ALL亚组和Ph-BCP-ALL亚组均无统计学差异。按复发时IKZF1突变状态,分为缺失亚组和非缺失亚组分析,伴有IKZF1基因缺失的Ph+ALL,1年OS(43.7%)显著低于不伴IKZF1基因缺失的Ph+ALL患者(88.9%),(p=0.047);(3)通过对45组初发和复发配对标本的IKZF1基因突变谱分析,结果显示24.4%(11/45)的患者IKZF1基因外显子缺失出现动态变化:在20例Ph+ALL亚组中,5例患者在复发时,原有IKZF1基因缺失克隆消失;在25例Ph-BCP-ALL亚组中,3例在复发阶段发生原有IKZF1基因缺失克隆消失,另3例在复发时出现新的IKZF1基因缺失克隆。结论:IKZF1基因缺失在成人BCP-ALL中检出率高,而且对Ph阳性/阴性、初发/复发BCP-ALL,均具有重要的预后分层意义,IKZF1基因缺失的动态变化是BCP-ALL复发克隆演化的重要分子遗传学特征之一。IKZF1基因缺失参与克隆演化的机制以及如何靶向IKZF1基因缺失,值得进一步深入研究。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.71
【图文】：

模式图,模式图,蛋白,基因

一章研究背景：ＩＫＺＦ１基因在急性Ｂ淋巴细胞白血病中的意研宄背景：ＩＫＺＦ１基因在急性Ｂ淋巴细中的意义逡逑及其表达产物逡逑ＩＪｋａｒｏｓ邋ｆａｍｉｌｙ邋ｚｉｎｃ邋ｆｉｎｇｅｒ邋１）基因在邋１９９２邋年在小鼠中首克隆，其序列在鼠和人类间高度保守。ＩＫＺＦ１基因在ＤＮＡ序列全长１２５ｋｂ，其共有８个外显子，其中７外显子所编码的蛋白Ｉｋａｒｏｓ是与染色质重塑相关的锌成员之一［９］。逡逑ＩＫＺＦ１逡逑

示意图,亚型,示意图,锌指结构域

号外显子编码出的４个锌指结构域组成，具有ＤＮＡ结合能力和转录活性；另逡逑一功能域为邻近Ｃ端的二聚体形成区，由８号外显子编码出的２个锌指结构域逡逑组成，参与Ｉｋａｒｏｓ蛋白二聚体的形成（图１－１）。逡逑正常情况下，Ｉｋａｒｏｓ蛋白相互间可通过它们共有的Ｃ端锌指结构域形成二逡逑聚体，发挥生理功能；或是与其他Ｉｋａｒｏｓ家族成员，如ＩＫＺＦ２基因编码的逡逑Ｈｅｌｉｏｓ和ＩＫ２Ｆ３基因编码的Ａｉｏｌｏｓ，通过Ｃ端锌指结构域形成二聚体或构成稳逡逑定的多聚体复合物，与Ｉｋａｒｏｓ协同作用，并可能部分地补充其功能１１Ｑ］。逡逑ＩＫＺＦ１基因与Ｂ细胞的发育逡逑１９９４年，Ｇｅｏｒｇｏｐｏｕｌｏｓ等通过Ｋｎｏｃｋｏｕｔ技术获得ＩＫＺＦ１基因缺陷小鼠，逡逑验证了邋ＩＫＺＦ１基因为Ｔ细胞、Ｂ细胞和ＮＫ细胞三类淋系细胞共同前体细胞的逡逑特有功能性标志［１１］。随后，研宄者对人类ＩＫＺＦ１基因深入研宄。ＩＫＺＦ１基因所逡逑编码的Ｉｋａｒｏｓ蛋白在胎儿和成人的未成熟胸腺细胞中表达最高；而在Ｂ细胞、逡逑ＮＫ细胞、成熟的Ｔ细胞及抗原提呈细胞（ＡＰＣ）中Ｉｋａｒｏｓ表达水平低下；在逡逑红系、髓系前体细胞中，Ｉｋａｒｏｓ同样有低水平表达。但在终极分化后，除了成逡逑熟的粒细胞外

线图,实验路,基因研究,线图

逦项士学位论文２．３主要溶液配制逡逑（１）逦ＢｕｆｆｅｒＡＷｌ缓冲液（室温保存）：逡逑Ｂｕｆｆｅｒ邋ＡＷ１邋１９ｍＬ逡逑无水乙醇２５ｍＬ逡逑（２）逦ＢｕｆｆｅｒＡＷ２缓冲液（室温保存）：逡逑Ｂｕｆｆｅｒ邋ＡＷ２邋１３ｍＬ逡逑无水乙醇３０ｍＬ逡逑３研宄方法逡逑３．１实验路线图逡逑

【参考文献】