MN1基因在髓系白血病中的研究

发布时间：2020-07-14 12:39

【摘要】：本论文包括三部分内容:第一部分:五例伴t(12;22)/MN1-ETV6髓系白血病的细胞及分子遗传学研究;第二部分:MN1及CD34基因在急性髓系白血病中的表达及意义;第三部分:MN1、CD34、BAALC、WT1基因用于急性髓系白血病复发的检测。第一部分五例伴t(12;22)/MN1-ETV6髓系白血病的细胞及分子遗传学研究目的:系统分析伴有t(12;22)/MN1-ETV6髓系白血病的临床及实验室特征。方法:采用常规R显带技术进行核型分析,进一步通过荧光原位杂交技术(FISH)验证MN1及ETV6断裂重排,其中部分患者采用PCR技术检测ETV6-MN1/MN1-ETV6融合基因并测序验证基因断裂位点;随访患者化疗疗效及生存情况。结果:5例患者中4例为急性髓系白血病(2例AML-M0、2例AML-M4)、1例为慢性粒单核细胞白血病(CMML)。5例患者均在初诊时检出t(12;22)(p13;q12),同时FISH证实5例患者均存在MN1及ETV6重排。4例患者进行PCR和测序分析,证实其中4例ETV6-MN1阳性、3例MN1-ETV6阳性。本组中2例患者仅化疗,其中1例死亡,生存期为2个月,另一例随访9个月后失访;1例患者明确诊断后仅支持治疗,随即出院失访;2例化疗后行HSCT,其中1例患者死于重症感染,生存期为2个月,另一例至今存活,随访期13个月。结论:t(12;22)/MN1-ETV6是一类少见的再现性染色体异常,易位后形成MN1-ETV6/ETV6-MN1融合基因。此类异常患者常具有难治性,预后不良等特点。第二部分MN1及CD34基因在急性髓系白血病中的表达及意义目的:探讨MN1、CD34基因表达与急性髓系白血病临床、分子及细胞遗传学、疾病预后的关系。方法:用RT-PCR方法检测2013年4月—2016年9月收治的337例初治AML患者的MN1及CD34基因表达水平,分析其与临床、分子及细胞遗传学以及疾病预后的关系。结果:1.AML伴inv(16)及c-kit基因突变者MN1基因高表达(P值为0.0001及0.0049),MLL重排及NPM1突变者MN1基因低表达(P值为0.0003及0.0001)。2.MN1基因表达与CD34、BAALC基因表达呈正相关(P值均0.0001),而与WT1及EVI基因表达无关(P值为0.4864及0.7903)。3.MN1高表达组AML与inv(16)(P0.0001)、CEBPA双突变(P=0.0113)及c-kit突变(P=0.0314)呈正相关;与外周血PLT(P=0.0113)、LDH(P=0.0204)、骨髓原始细胞(P=0.0348)、M5比例(P=0.0060)、MLL重排(P=0.0028)、NPM1突变(P0.0001)呈负相关。4.高MN1/CD34值(MN1、CD34基因表达拷贝数比值)与年龄(P=0.0373)、WBC(P=0.0444)、PLT(P=0.0013)、M4比例(P0.0001)、M5比例(P=0.0159)、inv(16)(P0.0001)、NPM1突变(P0.0001)及DNMT3A突变(P=0.0003)呈正相关;与M1比例(P=0.0254)、M2比例(P0.0001)、t(8;21)(P0.0001)、CEBPA双突变(P0.0001)呈负相关。5.生存分析显示,MN1表达高低与AML总生存率(OS)无关(P=0.9967),而高MN1/CD34值与较短OS相关(P=0.0058)。各ELN危险分层中,高危组(P=0.0222)及低危组(P=0.0281)中高MN1/CD34与不良预后相关,中危组中OS率仅可见一定趋势而无统计学差别(P=0.3586)。单因素分析显示年龄(P=0.0003)、LDH(P=0.0124)、骨髓原始细胞比例(P=0.0453)、核型危险分层(P=0.0216)、FLT3突变(P=0.0070)、MN1/CD34值分组(P=0.0066)有统计学差异;多因素分析显示年龄(P=0.0031)、LDH(P=0.0026)、MN1/CD34值(P=0.0204)有统计学差异。结论:1.MN1基因高表达于AML伴inv(16),而低表达于AML伴MLL重排及NPM1突变。2.AML中MN1基因表达与BAALC、CD34基因表达呈正相关性。3.通过联合MN1及CD34基因表达较好可用于AML患者预后评价。第三部分MN1、CD34、BAALC、WT1基因用于急性髓系白血病复发的检测目的:探讨MN1、CD34、BAALC、WT1基因表达用于急性髓系白血病复发的预测。方法:用RT-PCR方法检测2013年4月—2016年9月收治的23例复发AML患者全病程骨髓RNA标本的MN1、CD34、BAALC、WT1基因表达量,并用于AML复发的判断。结果:1.23例AML总体分析显示,MN1(P=0.0282)、CD34(P=0.0111)、WT1(P0.0001)在缓解时表达量较初诊时降低;MN1(P=0.0040)、CD34(P0.0001)、BAALC(P=0.0005)、WT1(P0.0001)在疾病复发时表达量较缓解时增高。2.23例AML配对分析显示,MN1在16例(P=0.0150)、CD34在17例(P=0.0010)、BAALC在15例(P=0.0116)、WT1在23例(P0.0001)患者疾病缓解时基因表达量较初诊降低;MN1在19例(P=0.0002)、CD34在22例(P0.0001)、BAALC在18例(P=0.0019)、WT1在22例(P0.0001)患者疾病复发时表达量较缓解增高。3.MN1、CD34、BAALC、WT1四种基因联合分析显示,100%(23/23)AML患者在复发时存在至少二种、91.3%(21/23)患者存在至少三种、69.5%(16/23)患者存在四种基因表达增高。4.23例患者中其中6例进行4种基因与融合基因的比较,例6、21患者MN1、CD34、BCCLC、WT1增减(例21 BAALC除外)与MLL-AF6相符;例7、13、23患者MN1、CD34、BAALC、WT1增减(例23 MN1除外)与AML1-ETO相符;例20患者MN1、CD34、BAALC、WT1升高与CBFβ-MYH11相符。结论:联合检测MN1、CD34、BAALC、WT1四种基因可用于AML复发预测,且与MLL-AF6、AML1-ETO、CBFβ-MYH11有较好一致性。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.7
【图文】：

a.b. c.图1. 一例伴t(12;22)(p13;q12) CMML患者骨髓形态图(a．瑞氏染色，100 ×；b．瑞氏染色，1000×；c．POX染色，1000×)

例3患者合并+8异常，例4患者合并+8、+22异常。图213;q12) R显带核型图。 2. 5 例伴 t(12;22)髓系肿瘤患者细胞遗传学、分子生物学及治疗反染色体核型 FISH RT-PCR 治疗 化疗后 7-14dBM 原始细胞,X,-Y,t(12;22)(p13;q12)[10] MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1MN1-ETV6IA+HSCT 76% 6,XY,t(12;22)(p13;q12)[7]/46,XY[3]MN1（+）ETV6（+）- 支持治疗 - XX,+8,t(12,22)(p13;q12)[10] MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1n.a.IA 65% 8,XX,+8,t(12;22)(p13;q12),+22[20]MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1MN1-ETV6IA 24% 6,XX,t(12,22)(p13;q12)[10] MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1MN1-ETV6DAC+HSCT-

ETV6基因重排FISH图。MN1断裂重排 ETV6断裂重排图3. 一例伴t(12;22)(p13;q12) CMML患者MN1及ETV6断裂重排FISH图（白色箭头表示断裂重排阳性）4.RT-PCR 及测序：4例患者进行RT-PCR检测，4例患者均为ETV6-MN1阳性，3例患者MN1-ETV6阳性（例3患者按既往文献引物未检测到MN1-ETV6融合基因[7]，由于无RNA标本，未使用本文引物复测），例5 MN1-ETV6为弱阳性。图4为例1、4、5患者RT-PCR结果。测序结果显示4例患者MN1及ETV6基因断裂位点相同，MN1断裂位点位于第2号外显子起始出（4737位核苷酸），ETV6断裂位点位于第2号外显子末端（437位核苷酸）

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4 王

本文编号：2754981