遗传性皮肤病基因突变位点筛查及体外实验预测内含子突变对基因剪切的影响

发布时间：2020-07-24 11:53

【摘要】：目的1、针对已经收集到的4个遗传性皮肤病患者,包括卟啉病1例,结节性硬化症1例,交界性大疱性表皮松解症1例及少汗型外胚层发育不良1例,进行基因筛查,确定各患者可能的致病基因突变位点,为该患者提供遗传咨询和产前诊断。2、设计体外实验验证已发现的少汗型外胚层发育不良患者所携带的EDA基因c.925-14TA突变会引起了剪切位点变化。方法1、提取临床拟诊断患者及其亲属外周血DNA,通过聚合酶链式反应扩增目的基因外显子及其侧翼序列,利用Sanger法及第二代测序方法来筛查突变位点。2、利用质粒载体及逆转录方法,通过体外实验检测并验证ED4基因c.925-14TA突变对转录过程中剪切位点的影响。结果1、对拟诊断4个患者进行基因序列分析,发现了 3个新发突变位点。结节性硬化患者携带TSC2基因c.5130-5131insT体细胞镶嵌突变,交界性大疱性表皮松解症患者LAMA3基因发生大片段缺失,少汗型外胚层发育不良患者携带EDA基因c.925-14TA内含子突变,且患儿母亲和姨母均为该突变的携带者。2、体外实验验证患者EDA基因内含子突变位点导致基因剪切位点发生明显改变。最终导致在合成的EDA-A1蛋白Glu308和Va1309中加插入4个多余的氨基酸。结论1、利用第二代测序及聚合酶链式反应方法可以筛查出可能参与引起患者相应的临床表型的基因突变位点,为了明确新发突变位点的致病性则需进一步设计实验研究。2、TSC2基因发生体细胞镶嵌突变c.5130_5131insT是导致该患者较轻结节性硬化症表型的原因。体细胞镶嵌突变的存在很可能是导致结节性硬化症基因筛查检出率低的一个重要原因。3、EDA基因内含子发生c.925-14TA突变为致病性突变,导致剪切位点改变,且该种剪切方式恰好导致在Glu308和Va1309中加插入4个多余的氨基酸,严重影响了外胚层发育不良素A的功能。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R751
【图文】：

患者,图片,足趾,皮肤

2.1.1 卟啉病患者，男性，44 岁。大约 3 岁起，头部、四肢、躯干等皮肤反复出现水疱、血疱，破溃后创面易形成糜烂、溃疡，伴疼痛，干燥后皮损处多结痂或形成瘢痕。皮损反复发作，且呈现夏季加重而冬季稍缓解的规律。手指、足趾等部位皮肤反复出现易破溃小水疱，干燥后形成痂皮脱落，四肢肢端逐渐损耗，手指、足趾短小。水疱发作时常伴发热，于当地卫生所行青霉素、头孢等抗炎治疗（具体用药史不详）症状可缓解。患者长期务农，无吸烟、酗酒史。查体：患者面容老态，面部、颈部、四肢等皮肤曝光部位可见散在色素沉着及萎缩性瘢痕，局部可见血痂、厚痂。耳廓瘢痕明显，部分软骨残缺（图 1A）。鼻变小、鼻尖削尖。全身皮肤可见散发明显痂皮、瘢痕，曝光部位明显。手指、足趾可见指端毁型，多个关节可见僵硬变形（图 1B、C）。患者双亲体健，为表兄妹，育有 3 子 7 女，患者排行老四。其兄于 1 岁去世，具体原因不详，其弟及姐妹均体健。患者妻子为后天痴呆患者，无家族史。育有 1 子 1 女，均体健未出现与患者类似症状。

结节性硬化症,图片,患者,头发

图 2 结节性硬化症患者图片2.1.3 少汗型外胚层发育不良患者男，2 岁。出生时头发稀疏，面中部可见湿疹样皮损。发育过程中多次出现因出汗不良导致的高热。查体：头皮光滑，头发稀疏，几乎未见毛孔。眉毛、睫毛等毛发稀少。双颧部可见细碎状棕褐色鳞屑（图 3A）。口腔检查仅可见 2 颗发育不良的楔形尖

家系图,少汗,家系图,图片

图 3 少汗型外胚层发育不良患者图片及家系图2.1.4 交界性大疱性表皮松解症患者男，出生时即可见头皮、臀部、腕部水疱。水疱迅速进展弥漫全身，2个月时前来就诊，全身多处皮肤大疱，破溃后糜烂、渗液、结痂，伴声音嘶哑，喂养困难。

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