时间节律基因对白血病的影响及作用机制研究

发布时间：2020-07-31 12:17

【摘要】：目的本课题通过分析时间节律基因CLOCK、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1和细胞周期基因C-myc、CyclinD1、Wee1在白血病中的表达情况,研究该基因家族在白血病中的可能机制。通过分析节律基因Per2对耐药的慢粒细胞株KCL22细胞的增殖、凋亡及分化的影响,进一步探讨Per2基因在白血病耐药过程中可能发挥的作用,从而为白血病的治疗寻找新靶点。方法用qRT-PCR定量检测30例CML、50例AML患者骨髓标本和30例正常人外周血中节律基因CLOCK、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1和细胞周期基因Cmyc、CyclinD1、Wee1的mRNA的表达水平。构建节律基因Per2过表达慢病毒,转染慢粒细胞株KCL22细胞,并筛选稳定株,通过CCK-8检测KCL22细胞的增殖,流式细胞术检测KCL22细胞凋亡、分化情况。结果与正常人相比,AML、CML患者中节律基因CLOCK与细胞周期基因Cmyc、CyclinD1表达升高,而节律基因Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1与细胞周期基因Wee1表达降低(P0.05);AML、CML中CLOCK、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Wee1、C-myc、CyclinD1两两之间呈线性相关(P0.05)。其中AML中,Per1与Per2表达水平呈正相关(r=0.538,P0.01),Per1与Per3表达水平呈正相关(r=0.497,P0.01),Per2与Per3表达水平呈正相关(r=0.376,P0.05)。在CML中,Per1与Per2表达水平呈正相关(r=0.658,P0.01),Per1与Per3表达水平呈正相关(r=0.592,P0.01),Per2与Per3表达水平呈正相关(r=0.385,P0.05)。成功构建了Per2过表达慢病毒,转染慢粒细胞株KCL22细胞,并筛选到过表达Per2的KCL22/Per2稳定株,将其作为实验组。与对照组(KCL22/untreated)和空载组(KCL22/empty)比较,Per2过表达使KCL22细胞增殖受抑,细胞周期G1期细胞增多[实验组(41.46±0.01)%,空载组(30.51±0.32)%,对照组(27.07±0.6)%,P0.05],对细胞凋亡无明显影响[实验组(7.63±0.12)%,空载组(7.98±0.21)%,对照组(8.33±0.01)%,P0.05]。结论CLOCK、C-myc、CyclinD1可能作为促癌因子发挥作用,Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Wee1可能作为抑癌因子发挥作用,并且这些节律基因之间相互作用,相互影响,共同调节人体内的昼夜节律,进而影响肿瘤细胞增殖。其中,Per1、Per2、Per3在白血病的发生、发展中占重要地位。过表达的Per2能够抑制慢性粒细胞KCL22细胞的生长和增殖,促使细胞周期阻滞于G1期,对细胞凋亡无明显影响。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.7
【图文】：

荧光显微镜下观察的KCL22细胞株

Western-blot检测Per2蛋白表达水平

实验组细胞 G1 期所占比例升高（如表 14 和图9，10 所示），差异具有统计学意义（P<0.05），提示 Per2 表达上调后，能促使慢粒细胞 KCL22 细胞周期阻滞于 G1 期。

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本文编号：2776464