基因Ⅶ型新城疫病毒样颗粒的构建及免疫效果研究

发布时间：2020-08-02 04:05

【摘要】：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的以感染禽类为主的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。接种疫苗是防制ND的重要措施之一。目前,基于NDV相关分子流行病学数据分析表明基因VII型已经成为危害我国及其他多数国家养禽业的主要优势基因型,而市售疫苗为基因II型LaSota株,其与流行株之间被证明具有抗原差异,是造成免疫偏差的主要原因之一,这也提示我们使用与流行毒株基因型匹配的疫苗防控ND无疑具有很大的优势和潜力。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒结构蛋白模拟天然病毒粒子正确地折叠、组装形成的不含病毒任何遗传物质的结构,其作为疫苗使用时,具有很大的防控潜力。本研究立足杆状病毒载体表达系统,VLPs疫苗生产平台,以基因VII型NDV NA-1株为研究对象,研制了利用NDV M蛋白同时展示F和HN蛋白的基因VII型新城疫病毒样颗粒(ND VLPs),并对其免疫效果进行了研究。为制备基因VII型新城疫病毒样颗粒,本研究利用杆状病毒载体表达系统,构建了分别编码新城疫病毒M、F和HN结构基因的单顺反子重组杆状病毒,转染Sf9细胞后,进行细胞病变观察、PCR鉴定以及间接免疫荧光法检测,结果表明成功构建了三种重组杆状病毒;共感染Sf9悬浮细胞后,收集培养上清进行超速离心浓缩,蔗糖密度梯度纯化。SDS-PAGE,western blot检测到三种目的蛋白正确表达且组装,透射电镜观察到直径大小在200 nm范围,含有囊膜突起的圆形或椭圆型的NDV典型特征的病毒样粒子,纯化后血凝效价可达12log2。表明三种目的蛋白正确组装形成具有较高血凝活性的ND VLPs,为进一步研究其免疫原性奠定了基础。为进一步研究制备的ND VLPs的免疫效果,以含25μg蛋白剂量的ND VLPs或联合佐剂免疫商品鸡,进行血清HI抗体监测,结果表明该VLPs免疫鸡后,能够诱发产生较高水平的HI抗体;进一步进行强毒株NA-1的攻毒试验,结果表明ND VLPs及联合佐剂免疫鸡后能够提供100%保护作用,与LaSota灭活油乳苗相比,能够有效减少攻毒鸡口咽、泄殖腔途径的排毒时间、排毒量以及鸡肺组织的载毒,从而减少病毒在健康鸡群的传播感染机会。综合以上,本研究利用杆状病毒载体表达系统,成功构建并表达了由NDV M、F和HN三种蛋白组装形成的ND VLPs,免疫鸡后能够产生较高水平的HI抗体,具有完全的保护作用,且能够有效阻止病毒向外界排出,表明研制的基因VII型新城疫病毒样颗粒作为疫苗候选株具有很大的防控优势。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

【参考文献】

相关期刊论文 前7条

1 王珂;袁乾亮;尹仁福;薛聪;钱晶;穆昱;张平仄;杨明曦;张晟;韩丽;丁壮;;强、弱毒力新城疫病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国兽医学报;2017年01期

2 丁壮;尹仁福;薛聪;王建忠;钱晶;;新城疫流行病学新特点及鹅新城疫防控策略[J];中国兽医学报;2015年01期

3 李志杰;丁壮;毕玉海;徐明;;鹅源副粘病毒NA-1株与鸡新城疫病毒F48E9株的抗原变异关系分析[J];中国兽医学报;2008年03期

4 吴芬芳;闫丽辉;曹殿军;刘培欣;闻晓波;孔宪刚;;新城疫病毒样颗粒(ND-VLPs)免疫效力的研究[J];中国预防兽医学报;2008年01期

5 胡顺林;孙庆;吴艳涛;张艳梅;刘秀梵;刘玉良;王曲直;;用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株[J];微生物学报;2007年02期

6 曹殿军;新城疫诊断和流行病学的分子生物学时代[J];中国家禽;2002年20期

7 丁壮,王承宇,向华,潘玉民,于为民,邹啸环;鹅副粘病毒分离株生物学特性的研究[J];中国预防兽医学报;2002年05期

本文编号：2778136