干扰素-α对人神经母细胞瘤（SH-sy5y）抑郁相关基因表达的影响

发布时间：2020-08-19 09:43

【摘要】：背景干扰素-α是临床上广泛应用的一种抗病毒、抗肿瘤药物,但长疗程应用患者易出现精神抑郁等不良反应,且发病率较高。目前IFN-α引起抑郁症的发病机制尚不确定,中枢单胺类神经递质学说是重要的假说之一,认为大脑中单胺递质水平不足时,大脑细胞之间的信号传递就会出现故障,进而出现抑郁症样行为。有研究报道外周血中adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表达的改变与抑郁症有密切关系。故阐明IFN-α引起抑郁症的分子机制,利于其发挥最大疗效。目的探讨IFN-α对人神经母细胞瘤中adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表达水平的影响。方法1.细胞培养:将SH-sy5y细胞悬液加入RPMI1640培养基中(含10%灭活胎牛血清、25m M Hepes、2m M L--谷氨酰胺、100 ug/m L链霉素、100U/m L青霉素),放置于37℃、含5%CO2、70%-80%湿度的培养箱中进行培养,每隔两天给细胞换液一次。2.药物处理:培养的SH-sy5y细胞分为两组:实验组给予浓度为1000IU/ml干扰素α-2b注射液,对照组加入PBS缓冲液,药物刺激16小时。3.Real Time PCR检测:Trizol法分别提取两组细胞总RNA,并鉴定所提取的RNA质量,反转录合成c DNA,根据已知基因序列设计两端引物,以c DNA为模板进行实时荧光定量PCR,检测两组细胞adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表达情况。4.统计学分析:实验结果用均数±标准差(x±s)来表示,利用单因素方差分析,独立样本t检验,P0.05为差异显著,有统计学意义,Graph Pad Prism 5软件进行结果分析并制做柱状图。结果实时荧光定量PCR结果显示,IFN-α组adcy3,dgka,fam46a,marcks,raph1,psme1基因表达水平与PBS组有显著性差异(P0.05),其中adcy3和marcks基因表达水平比PBS组减少,而dgka,fam46a,raph1,psme1基因比PBS组表达增加;igsf4a,kiaa1539基因在两组表达无显著性差异(P0.05)。结论1.IFN-α刺激能使SH-sy5y细胞adcy3和marcks基因表达水平显著降低;而dgka,fam46a,raph1,psme1基因表达则显著升高。2.IFN-α对SH-sy5y细胞igsf4a,kiaa1539基因表达无显著影响。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.4
【图文】：

15 秒 40 循环45 秒荧光 PCR 反应结束后，分析反应并记录保存，对结果进行统计学分用 EXCEL 表格处理，结果用均本 t 检验，P<0.05 表示显著差异结果分析并制做柱状图。胶电泳检测 RNA 的完整性细胞 SH-sy5y 的 RNA 后，用 1泳条带均清晰，且 28s 约为 18s 的明 RNA 提取成功，可以逆转录

荧光定量PCR扩增曲线图

荧光定量PCR溶解曲线图（adcy3）

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本文编号：2796940