猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是全球流行的极具威胁性的猪病之一,由具有高致死率的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起。该病在世界各地的爆发给全球养猪业造成了重大经济损失,但迄今为止尚无有效安全的疫苗可用。因此,研制安全高效的PEDV疫苗具有十分重要的意义。S蛋白是PEDV的主要结构蛋白,由S1区和S2区组成,其中S1含有3个中和表位区域,常作为PEDV基因工程疫苗研究中最重要的一个靶蛋白。本研究利用MultiBac多基因表达系统构建含有不同S1基因拷贝数的重组杆状病毒:AcMNPV-IM-p10S1、AcMNPV-IM-2p10S1、AcMNPV-IM-3p10S1、AcMNPV-IM-phS1、AcMNPV-IM-2phS1、AcMNPV-IM-3phS1、AcMNPV-IM-p10S1-phS1和AcMNPV-IM-2p10S1-2phS1,以实现S1蛋白在昆虫细胞中的高效表达,并将纯化后的S1蛋白作为基因工程疫苗使用,初步探索PEDV S1蛋白在BALB/c小鼠上的免疫效果。通过Western Blot和His标签ELISA定量检测试剂盒分析S1蛋白的表达情况,结果显示不同拷贝数的重组杆状病毒感染Sf9细胞后,S1蛋白均能有效表达,而且其蛋白表达量受到基因拷贝数和启动子的影响。1.当S1基因由1拷贝增加到3拷贝时,表达量随拷贝数的增加而增加,在3拷贝时表达量达到最高,4拷贝时有所下降。2.p10启动子驱动的蛋白表达量要显著高于polh启动子驱动的蛋白表达量。将表达的S1蛋白经过镍柱亲和层析纯化后与等量的佐剂混匀并乳化制备PEDV亚单位疫苗,然后将其背部皮下注射免疫小鼠。间接ELISA检测S1蛋白刺激小鼠产生的血清抗体水平。结果表明S1蛋白可以诱导小鼠产生特异性免疫反应。本研究利用杆状病毒多基因表达系统成功表达了PEDV S1蛋白,并利用多拷贝表达和替换启动子摸索了提高蛋白表达量的方法,而且纯化后的S1蛋白具有良好的免疫原性,为以后研发基于S1蛋白的PEDV基因工程疫苗提供有力的支持。
【学位单位】：南阳师范学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S852.4
【参考文献】
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本文编号：
2811094
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