P53基因多态性、骨髓来源抑制性细胞以及细胞因子IL-6、IL-8,IL-10与前列腺癌的关系研究
发布时间：2020-09-14 10:03
[目的]测定野生型P53(V/V)和突变型P53(G/G)对两种前列腺癌细胞的增殖、细胞周期调控及凋亡的影响,评估不同基因型P53在前列腺癌发生、发展中的作用。并测定血液中骨髓来源抑制性细胞的含量以及血清中细胞因子IL-6、IL-8,IL-10水平探讨其与前列腺癌发生、发展以及预后的相互关系。[方法]以pcDNA3.1空质粒、野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)和突变型的pcDNA3.1-P53(G/G)的质粒分别转染前列腺癌细胞,用Western Blot法检测细胞转染效率。MTT法检测不同转染组细胞的增殖情况。PI染色法结合流式细胞术检测细胞周期,并用Annexin V和PI进行荧光标记结合流式细胞术的方法检测不同基因型P53对前列腺癌细胞凋亡情况的影响。通过对分离处理之后的外周血液进行多色流式细胞检测并结合FlowJo软件对流式的数据进行了分析,获得了外周血骨髓来源抑制性细胞的含量。用ELISA的方法检测血清中IL-6、IL-8、IL-10细胞因子的含量。[结果]1、P53基因多态性对前列腺癌细胞的增殖、细胞周期调控及凋亡的影响1)、MTT检测结果:在转染24小时后,与对照组相比,野生型pcDNA3.1-P53(V/V)组和突变型的pcDNA3.1-P53(G/G)组抑制细胞增殖状况差异显著(P0.05),野生型和突变型之间的差异不显著。48小时后,野生型 pcDNA3.1-P53-(V/V)组,突变型的 pcDNA3.1-P53(G/G)组与对照组之间的差异也是显著的(P0.05);并且突变型的细胞抑制细胞增殖的程度比野生型组细胞更强些。72小时后,这一差异变得更加的显著(p0.05)。上述各组结果在PC3细胞和LNCaP细胞组之间无显著差异。2)、细胞周期检测结果显示:与转染空质粒的细胞和对照组细胞相比,转染突变型的pcDNA3.1-P53(G/G)组较转染野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)组,有更多比例的细胞处于G0/G1细胞周期(p0.05)。3)细胞凋亡结果显示:与对照组相比,野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)和突变型的pcDNA3.1-P53(G/G)的转染能够导致PC3和LNCaP细胞凋亡的速率增加,而在72小时时,突变型的pcDNA3.1-P53(G/G)与野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)相比更可能引起较明显的细胞凋亡(p0.05)。2、髓源抑制细胞(MDSC)各亚型水平在前列腺癌患者的外周血中较对照组和BPH患者对照组均有显著升高(P = 0.001)。且CD33+CD11b+HLA-DR-CD14-细胞是前列腺癌患者外周血中上升的最主要的一种髓源抑制细胞(MDSC)亚型,与前列癌临床阶段相关。3、与对照组和BPH患者相比,IL-6,IL--8和IL-10的含量在前列腺癌患者血清中均有显著升高(P0.01)[结论]1、野生型P53(V/V)和突变型P53(G/G)的过表达均可抑制前列腺癌细胞系PC3和LNCaP细胞的增殖,均可促使前列腺癌细胞系PC3和LNCaP细胞中处于G0/G1期的细胞比例上调,并促进细胞的凋亡比例上升,其中突变型的该作用较野生型的作用更为明显,在前列腺癌的发生过程中起一定的促进作用,2、前列腺癌患者血循环中MDSCs细胞比例有显著的增加,并且MDSCs比例随癌症阶段的发展显著地上升,MDSCs的含量与前列腺癌的发生、发展、以及预后密切相关。3、IL-6,IL--8和IL-10可能是参与前列腺癌发生、发展的重要细胞因子
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.25
【部分图文】：
谝徽拢校担郴饷蚨嗵嚯远郧傲邢侔┫赴鉬δ艿挠跋欤]3?胞表现出良好的生长状况。两组细胞均呈扁圆，但是ＰＣ３细胞表现出簇的形状，逡逑而ＬＮＣａＰ细胞在细胞体积上大于ＰＣ３细胞（图１邋）。逡逑ｉ逡逑？邋＾邋％邋？邋．逡逑：ａ逡逑图１．培养７２小时时的细胞形态。Ａ．邋ＬＮＣａＰ细胞；Ｂ．ＰＣ３细胞。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．邋Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ａｔ邋７２邋ｈ邋ａｆｔｅｒ邋ｃｅｌｌ邋ｃｕｌｔｕｒｅ．邋Ａ．邋ＬＮＣａＰ邋ｃｅｌｌｓ；邋Ｂ．邋ＰＣ３邋ｃｅｌｌｓ．逡逑２．２细胞转染及转染效率的测定逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ结果表明转染效率是令人满意的。检测还表明Ｐ５３的表达水逡逑平在对照组和空质粒组中非常低，而在ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）组，ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑组和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）组和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）组中Ｐ５３基因的表达却很高逡逑（图邋２）。逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋５３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋ＣＶＷ）邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋Ｓ３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑ｐ５３逦咖逦—丨丨１邋ｍｍｍ邋ＷＭＰ逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ逡逑｜逦逦逦逦邋ＬＮＣａＰ邋逦逦１邋Ｉ逦邋ＰＣ邋３邋逦１逡逑图２．ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ方法分析了Ｐ５３在ＰＣ３对照组，ＰＣ３－ｐｃＤＮＡ组，ＰＣ３－Ｐ５３（Ｇ／Ｇ）组，逡逑ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）组和邋ＬＮＣａＰ邋对照组
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与对照组相比，野生型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）和突变型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３逡逑（Ｇ／Ｇ）的转染能够导致ＰＣ３和ＬＮＣａＰ细胞凋亡的速率增加，而在７２小时时，逡逑突变型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）与野生型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）相比更可逡逑能引起较明显的细胞凋亡（图３和４）。逡逑ｔｘ邋ＤＫＡ逦｜＊－＞３邋＾邋ｔ＇■邋Ｖ邋－＊邋Ｖ邋）逡逑逦逦逦邋；＾ｒ逦邋￣邋ｔ＇一邋？＇ｉ邋ｉｒ邋＇—逦Ｔ邋邋…一．ｒ－？．－逡逑＾逦；＇＞邋玲．ｉｒ逦、p哄澹麇澹麇屐跺澹у危浚海垮澹麇澹麇义稀础澹阂痢敢唬Ву澹骸睿浚危穑危伲澹危辏蝈濉义希恚哄呜澹甑诲危慑危麇危辏哄危哄义蠆病铄义希簦唬惧澹弧觥觯縉邋￣ｉ逦＜，？—逡逑Ｈｉ邋播：邋：＞ｆｔ：逦＇逦｜？邋Ｖ邋－逦！＋？逦■；？逦｜＞卞邋Ｗ逦}沐澹皱鍈翦澹坎义贤迹常傲邢侔┫赴蹋危茫幔性谧静煌柿：螅玻春停罚残∈笔钡南赴蛲黾觳饨峁义希疲椋纾酰颍邋澹常澹粒穑铮穑簦铮螅椋箦澹铮驽澹穑颍铮螅簦幔簦邋澹悖幔睿悖澹蝈澹蹋危茫幔绣澹悖澹欤欤箦澹簦颍幔睿螅妫澹悖簦澹溴澹鳎椋簦桢澹洌椋妫妫澹颍澹睿翦澹穑欤幔螅恚椋洌箦澹幔翦澹玻村义希幔睿溴澹罚插澹瑁义
本文编号：2818041
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.25
【部分图文】：
谝徽拢校担郴饷蚨嗵嚯远郧傲邢侔┫赴鉬δ艿挠跋欤]3?胞表现出良好的生长状况。两组细胞均呈扁圆，但是ＰＣ３细胞表现出簇的形状，逡逑而ＬＮＣａＰ细胞在细胞体积上大于ＰＣ３细胞（图１邋）。逡逑ｉ逡逑？邋＾邋％邋？邋．逡逑：ａ逡逑图１．培养７２小时时的细胞形态。Ａ．邋ＬＮＣａＰ细胞；Ｂ．ＰＣ３细胞。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．邋Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ａｔ邋７２邋ｈ邋ａｆｔｅｒ邋ｃｅｌｌ邋ｃｕｌｔｕｒｅ．邋Ａ．邋ＬＮＣａＰ邋ｃｅｌｌｓ；邋Ｂ．邋ＰＣ３邋ｃｅｌｌｓ．逡逑２．２细胞转染及转染效率的测定逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ结果表明转染效率是令人满意的。检测还表明Ｐ５３的表达水逡逑平在对照组和空质粒组中非常低，而在ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）组，ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑组和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）组和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）组中Ｐ５３基因的表达却很高逡逑（图邋２）。逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋５３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋ＣＶＷ）邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋Ｓ３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑ｐ５３逦咖逦—丨丨１邋ｍｍｍ邋ＷＭＰ逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ逡逑｜逦逦逦逦邋ＬＮＣａＰ邋逦逦１邋Ｉ逦邋ＰＣ邋３邋逦１逡逑图２．ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ方法分析了Ｐ５３在ＰＣ３对照组，ＰＣ３－ｐｃＤＮＡ组，ＰＣ３－Ｐ５３（Ｇ／Ｇ）组，逡逑ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）组和邋ＬＮＣａＰ邋对照组
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与对照组相比，野生型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）和突变型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３逡逑（Ｇ／Ｇ）的转染能够导致ＰＣ３和ＬＮＣａＰ细胞凋亡的速率增加，而在７２小时时，逡逑突变型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）与野生型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）相比更可逡逑能引起较明显的细胞凋亡（图３和４）。逡逑ｔｘ邋ＤＫＡ逦｜＊－＞３邋＾邋ｔ＇■邋Ｖ邋－＊邋Ｖ邋）逡逑逦逦逦邋；＾ｒ逦邋￣邋ｔ＇一邋？＇ｉ邋ｉｒ邋＇—逦Ｔ邋邋…一．ｒ－？．－逡逑＾逦；＇＞邋玲．ｉｒ逦、p哄澹麇澹麇屐跺澹у危浚海垮澹麇澹麇义稀础澹阂痢敢唬Ву澹骸睿浚危穑危伲澹危辏蝈濉义希恚哄呜澹甑诲危慑危麇危辏哄危哄义蠆病铄义希簦唬惧澹弧觥觯縉邋￣ｉ逦＜，？—逡逑Ｈｉ邋播：邋：＞ｆｔ：逦＇逦｜？邋Ｖ邋－逦！＋？逦■；？逦｜＞卞邋Ｗ逦}沐澹皱鍈翦澹坎义贤迹常傲邢侔┫赴蹋危茫幔性谧静煌柿：螅玻春停罚残∈笔钡南赴蛲黾觳饨峁义希疲椋纾酰颍邋澹常澹粒穑铮穑簦铮螅椋箦澹铮驽澹穑颍铮螅簦幔簦邋澹悖幔睿悖澹蝈澹蹋危茫幔绣澹悖澹欤欤箦澹簦颍幔睿螅妫澹悖簦澹溴澹鳎椋簦桢澹洌椋妫妫澹颍澹睿翦澹穑欤幔螅恚椋洌箦澹幔翦澹玻村义希幔睿溴澹罚插澹瑁义
本文编号：2818041
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