SENP2基因在慢性淋巴细胞白血病发病中的作用及其机制

发布时间：2020-09-21 07:27

　　【目的】检测原代慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞中SENP2基因的表达情况,研究该基因的表达与CLL生物学特征的相关性。研究SENP2基因对CLL细胞的增殖能力、化疗药物敏感性、侵袭性、趋化功能以及细胞凋亡与周期的作用,及对CLL细胞NOTCH1、Wnt/β-catenin和NF-κB信号通路的影响,揭示SENP2基因在CLL发病中的作用及其机制。【方法】1.收集43例CLL外周血,分别采用q RT-PCR、Western Blot检测SENP2基因转录及蛋白表达水平。2.分别构建SENP2基因过表达或基因干扰的CLL细胞稳转株。采用CCK8、Transwell、Boyden小室及流式细胞术等方法检测该基因对CLL细胞的增殖能力、药物敏感性、侵袭转移能力、趋化功能以及细胞凋亡与周期的影响。3.采用q RT-PCR、Western Blot分别检测SENP2基因表达变化后NOTCH1、Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路相关基因的转录及蛋白水平变化。【结果】1.初治CLL的SENP2基因转录水平显著高于健康对照组,但其蛋白表达水平低于健康对照者。单因素分析发现,该基因转录水平与LDH表达水平高低存在正相关。2.SENP2基因过表达:(1)可以抑制CLL细胞株MEC2细胞的增殖;(2)阿糖胞苷、地塞米松作用24h时,增强药物对MEC2细胞的增殖抑制作用;(3)降低MEC2细胞的侵袭性;(4)减弱MEC2细胞对趋化因子CXCL12的趋化性;(5)对细胞周期和细胞凋亡无明显影响。SENP2低表达:(1)在培养24h时可以促进MEC2细胞的增殖,但随着时间的推移,对MEC2细胞的增殖转变为抑制作用;(2)阿糖胞苷作用24h时,减弱药物对MEC2细胞的增殖抑制作用;(3)增强MEC2细胞的侵袭性;(4)增强MEC2细胞对趋化因子CXCL12的趋化性;(5)对细胞周期和细胞凋亡无明显影响。3.q RT-PCR发现,SENP2基因转录水平与NOTCH1基因、Hes1基因、β-catenin、WWOX基因、NF-κB信号通路相关基因的转录水平无明显相关性。Westwen Blot发现,SENP2表达增加后,NOTCH1、C-myc、β-catenin及NF-κB信号通路相关分子P65、P50、IKKα、IKKβ的表达均发生了下调;而SENP2表达减少后,NOTCH1、C-myc、β-catenin及NF-κB信号通路相关分子P65、P50、IKKα、IKKβ的表达均发生了上调。【结论】1.初诊CLL的SENP2基因转录水平明显高于正常人。2.SENP2对CLL细胞的增殖、耐药性和趋化能力有负向调节作用。3.SENP2在蛋白水平负向调节NOTCH1、Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路,该调控作用可能与SENP2对蛋白质分子的可逆性SUMO化修饰有关。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R733.72
【部分图文】：

质粒,转染,倍数,过表达

a bc dPbabe-SENP2-48h（×100） Pbabe-SENP2-48h（×400）图 5. ×100 及×400 倍数下，分别转染了 Pbabe-hygro 空载质粒（Null control，NC）与Pbabe-SENP2 过表达质粒的 293T 细胞。NC-48h（×100） NC-48h（×100）

质粒,转染,倍数,过表达

基因对,过表达,流式细胞术,细胞凋亡

a bc d图12. Boyden小室检测SENP基因对MEC2细胞在CXCL12作用下的趋化性的影响a 过表达 NC 组，b 过表达 Pbabe-SENP2 组，c 干扰 NC 组，d 干扰 sh-SENP2 组（×100）

【参考文献】