松江鲈（Trachidermus fasciatus）几丁质酶基因的克

发布时间：2020-10-11 05:18

　　 松江鲈(Trachider fasciatus)是一种降海洄游性鱼类,为国家II级保护动物,具有较高的生态价值和经济价值。人工养殖是恢复其自然种群的有效手段,而养殖过程中必然需要解决其病害问题,比如致病真菌感染。几丁质酶(Chitinase)是一类水解几丁质的酶,广泛存在于动物、植物、微生物体内,具有多种生理功能,尤其是在抗真菌方面发挥着重要的作用。为了深入了解松江鲈的几丁质酶,本实验通过RACE技术克隆获得了松江鲈一个几丁质酶基因的cDNA全长,命为Tf-Ch1,并对其进行了生物信息学分析;构建其原核表达载体,获得重组蛋白,并对重组几丁质酶的活性和功能进行检测。Tf-Ch1的cDNA序列全长为1833 bp,开放阅读框(ORF)为1362 bp,编码453个氨基酸。Tf-Ch1包含一个信号肽和两个结构域,分别是N端的Glyco_18结构域,C端的CBM_14结构域。系统发育树结果表明所有的鱼类几丁质酶聚为一大支,其他脊椎动物的几丁质酶聚为一大支,Tf-Ch1与鲈形目的大黄鱼(Larimichthys crocea)的几丁质酶关系最近。体外抑菌实验表明,Tf-Ch1重组蛋白可以抑制黑曲霉(Aspergilluswiger)等真菌的生长。Tf-Ch1的糖结合结构域可以和几丁质等多糖结合,对酵母菌具有凝集作用,并且对于提高整个几丁质酶的酶活性具有重要意义。综合以上结果,我们推测Tf-Ch1对于松江鲈防御真菌的侵害具有一定作用。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：Q953
【部分图文】：

松江鲈原产于中国、日本、韩国和菲律宾等国家，在中国用的历史已有近两千年，最早的文字记录可追溯至汉代。后，由于环境污染、洄游路线受阻及过度捕捞等问题，松降，己被列为国家ＩＩ级保护动物。??，关于松江鲈的研究主要集中在养殖［１］、胚胎发育［２］、生态方面，对其功能基因的研宄较少。近年来，本实验室致力研究，己获得一些结果，得到了部分免疫相关基因的序列ｐｅ?ｌｅｃｔｉｎ）［４］、纤维蛋白原相关蛋白１和２（ｎｂｒｉｎｏｇｅｎ－ｒｅＲＥＰｌ／２）［５’６］、超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）［７］、白细酶?４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－ｌ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｋｉｎａｓｅ－４，?ＩＲＡＫ－４）［８］、（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ?Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）［９］等，并且对这些基因进行了初步果为松江鲈其他功能基因的研宄提供了参考依据，并为松量的恢复提供了理论依据。??

２．?３．１Ｔｆ－Ｇｈ１基因的序列分析??通过ＲＡＣＥ技术及片段拼接，我们得到了?Ｔｆ－Ｃｈｌ的ｃＤＮＡ序列全长。中ｃＤＮＡ序列全长为１８３３?ｂｐ，开放阅读框（ＯＲＦ）为１３６２?ｂｐ，编码４５３个氨酸（图２．３．２）。预测蛋白分子量为５２４１７．５９?Ｄａ，理论等电点（ｐｉ）为６．６４。ＳＭＡＲＴ结构域预测表明，Ｔｆ－Ｃｈｌ包含一个信号肽和两个结构域，分别是Ｎ端的Ｇｌｙｃｏ＿ｌ?８（Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ?ｈｙｄｒｏｌａｓｅ?ｆａｍｉｌｙ?１８）结构域，Ｃ?端的?ＣＢＭ＿１４（?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｍｏｄｕｌｅｓ?１４）结构域。其中信号肽是从第１位氨基酸残基到第１９位氨基酸残基，??Ｎ端结构域是从第２０位氨基酸残基到第３６２位氨基酸残基，Ｃ端结构域是从４０７位氨基酸到第４５３位氨基酸（见图２．３．１）。??

ＸＭ＿００４５７４４８３）、亚洲尖吻鲈（Ｚａｔｏ?ＸＭ＿０１８６６７５４８）、大黄鱼??｛Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ?ｃｒｏｃｅａ，?ＸＭ＿０１０７４９４４４）、球状濑鱼ｂｅｒｇｙｌｔａ，??ＸＭ—０２０６５４２９３）、眼斑双锯鱼〇４哪／２少ｒ／仍ｏｃｅ／／仍丸ＸＭ—０２３２６４０１０）、多棘雀??觸ＸＭ＿〇２２２１４８３４）、高体獅ｄｗｗｅｒｉ／／，??ＸＭ＿０２２７４５０２０）、底鏘鱼ＸＭ＿０２１３２１９４４）、非洲齿鲤??（Ｎｏｔｈｏｂｒａｎｃｈｉｕｓ?ｆｕｒｚｅｒｉ，?ＸＭ＿０１５９４１７１５）?＞?虎尾海马（Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?ｃｏｍｅｓ，??ＸＭ＿０１９８６７６１４）、青鏘鱼？仍?ｔｏ／ｐａ，?ＸＭＪＫＭ０６８９１８）、三湖慈鲷??（尸ＸＭ＿００５７４９８６７）、伯氏朴?Ｈ０?鱼?Ｚ？Ｗ７勿机??ＸＭ—００５９３９７６６）、红树錯鱼ＸＭ＿０１７４３３４０９）、西方爪??（Ｘｅｎｏｐｕｓ?ｔｉＡ〇ｐｉｃａｌｉｓ，?ＮＭ＿００１１９９５６０）、中部鬃獅撕ｖ／Ｍ／ｃｅ／ｉｓ１，??ＸＭ＿０２０７９８０２７）的序列比对结果构建系统发育树。结果表明，所有的鱼类几丁??质酶聚为一大支，其他脊椎动物的几丁质酶聚为一大支，Ｔｆ－Ｃｈｌ与辦形目大黄??鱼的几丁质酶关系最近（见图２．３．４）。??１００?｜?Ｓｅｎｏｌａ?ｉａｆａｎｄｉ?ｄｏｒｓａｉｉｓＸＭ＿０２３４２４７２９??＇?＇
【参考文献】

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1 糜艳霞;任慧;张常;刘建红;范晓军;;几丁质酶的研究进展[J];生命科学研究;2015年05期

2 阎瑞香;张娜;关文强;于晋泽;;重组几丁质酶对不同果蔬病原真菌的抑菌效果研究[J];华北农学报;2014年04期

3 王荻;李绍戊;卢彤岩;刘红柏;;鱼类抗菌肽的功能及应用前景[J];水产学杂志;2012年04期

4 王卫卫;吴谡琦;孙修勤;樊廷俊;;硬骨鱼免疫系统的组成与免疫应答机制研究进展[J];海洋科学进展;2010年02期

5 胡梅;陈根强;杜根平;;20种中草药提取物对一株柑橘采后致腐真菌的抑制作用[J];天津农业科学;2009年02期

6 蔡秋月;;围食膜因子的分子结构及其功能[J];广西轻工业;2007年06期

7 王金秋,潘连德,梁天红,甘华臣;松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)胚胎发育的初步观察[J];复旦学报(自然科学版);2004年02期

8 孙德文,詹勇,许梓荣;鱼类免疫系统的研究进展[J];水利渔业;2002年06期

9 王金秋;松江鲈的生态学和繁殖生物学的研究进展[J];水生生物学报;1999年06期

10 张民楷;松江鲈及其增养殖[J];科学养鱼;1995年05期

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2 张秋霞;松江鲈（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆、表达与功能分析[D];山东大学;2013年

3 刘雪娇;日本七鳃鳗几丁质酶基因的克隆及功能的初步研究[D];辽宁师范大学;2009年

本文编号：2836126