siRNA沉默LMO4基因对人胆囊癌细胞系生长的影响

发布时间：2020-10-12 05:01

　　 目的:胆囊癌(GBC)是最常见的胆道恶性肿瘤。这种恶性肿瘤的诊断和预后指标还没有得到广泛的研究,而且由于缺乏明显的症状和体征,大多数患者被诊断为晚期和不可治愈的阶段。此外,胆囊癌对化疗或放疗不敏感,手术切除是唯一可能有效的治疗手段。在哺乳动物体内,LIM-onlyfactor4(LMO4)是LMO蛋白家族成员之一,在细胞增殖方面起着的重要转录调节作用,无论是在哺乳动物正常发育,还是在肿瘤的形成过程中均起着重要的调控作用。LMO4高表达于上皮-间质相互作用活跃的区域,肿瘤发生的机制与其表达的失调呈正相关趋势。细胞核中LMO4的表达水平可以作为乳腺癌、胰腺癌以及舌癌预后的一个独立预测因子,然而,迄今为止尚未发现LMO4对胆囊癌细胞的研究文献报道。本研究的目的是探讨靶向LMO4的siRNA抑制LMO4基因对人胆囊癌OCUG及NOZ细胞系生长的影响,为LMO4可作为胆囊癌的一种很有效的生物标志物和治疗目标提供实验数据和支撑。方法:本次研究主要采用siRNA降低LMO4基因的表达观察对OCUG及NOZ细胞系的增殖、凋亡的影响。RT-PCR和Western blot检测转染siRNA后对LMO4在中OCUG及NOZ细胞系的表达的影响。cck-8细胞计数及集落形成实验观察转染siRNA后OCUG及NOZ细胞系细胞增殖的速度。结果:RT-PCR和Western blot检测的结果显示,转染siRNA后能够有效抑制LMO4在OCUG及NOZ细胞系中的表达。cck-8细胞计数及集落形成实验证明,转染siRNA后能够有效抑制OCUG及NOZ细胞系细胞增殖的速度明显变慢。结论:LMO4的表达与胆囊癌的增殖、分化有关。LMO4水平可以预测胆囊癌患者的预后,尤其是那些高增殖的胆囊癌。这项研究增加了我们在胆囊癌增殖过程中LMO4发挥作用的认识,并可能为临床胆囊癌患者的治疗提供新的分子靶点。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.8
【部分图文】：

图2 qRT-PCR检测siRNA转染后LMO4的mRNA表达量2.3 siRNA 转染 OCUG 及 NOZ 后 LMO4 蛋白表达水平为了检测 siRNA 转染 OCUG 及 NOZ 胆囊癌细胞后的相对蛋白表达量有无差异，利用 siRNA 转染细胞 72h予细胞蛋白定量后行 Western blot 观察 siRNA 转染 OLMO4 表达 OCUG 及 NOZ/LMO4 的相对蛋白表达量，OCUG 及 NOZ 胆囊癌细胞后 LMO4 表达的蛋白量明显图 3。OCUG NOControl si-LMO4 CLMO4(17KD)

图2 qRT-PCR检测siRNA转染后LMO4的mRNA表达量2.3 siRNA 转染 OCUG 及 NOZ 后 LMO4 蛋白表达水平为了检测 siRNA 转染 OCUG 及 NOZ 胆囊癌细胞后 LMO4 表达 OCUG/LM的相对蛋白表达量有无差异，利用 siRNA 转染细胞 72h 后提取蛋白，用 BCA 法予细胞蛋白定量后行 Western blot 观察 siRNA 转染 OCUG 及 NOZ 胆囊癌细胞LMO4 表达 OCUG 及 NOZ/LMO4 的相对蛋白表达量，结果显示：经 siRNA 转OCUG 及 NOZ 胆囊癌细胞后 LMO4 表达的蛋白量明显低于对照组(P<0.05) ，图 3。OCUG NOZControl si-LMO4 Control si-LMO4

山西医科大学（博）硕士学位论文第一次计数，测出 OD 值作为基础数值即第 0 天的结果保存监测 5 天并保存 OD 值，利用标准曲线进行数据分析显示：与组胆囊癌细胞 OCUG 及 NOZ 增殖速度显著降低，这种增殖意义(P<0.05)，见图 4。
【参考文献】

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1 李静怡;申秀锦;邓红;;LMO4调节肿瘤发生过程中的上皮-间质转化[J];浙江大学学报(医学版);2011年01期

本文编号：2837682