慢病毒介导NFAT基因对HepG2细胞生物学行为影响

发布时间：2020-10-25 19:58

　　 目的:通过对人HepG2细胞转染载有NFAT-Sh RNA的慢病毒,观察其对HepG2细胞生物学行为的影响。方法:设计3种针对NFAT基因的ShRNA的干扰序列及阴性对照序列,采用稳定转染的方式构建稳定转染细胞系,挑选出干扰效率最高的ShRNA组用于后续实验,采用qRT-PCR法检测慢病毒转染后NFAT mRNA及VEGFA mRNA表达情况,Western Blot法检测NFAT蛋白及VEGFA蛋白表达量,CCK-8法检测HepG2细胞增殖情况,Transwell法检测细胞迁徙及侵袭能力。结果:3种干扰慢病毒中以ShRNA103干扰效果最好。3种NFAT-ShRNA干扰作用后,NFAT、VEGFA mRNA及蛋白水平相对于对照组降低(P0.05),阴性对照组未见明显变化。CCK-8结果显示干扰组细胞增殖能力较对照组受到抑制。Transwell结果显示干扰组细胞迁徙及侵袭能力较对照组均有所下降。结论:通过RNA干扰技术沉默NFAT基因后,其细胞增殖能力及迁徙侵袭能力均下降,其作用可能与调节VEGFA有关,为靶向NFAT基因治疗原发性肝癌提供相关实验依据。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7
【部分图文】：

图 1 荧光显微镜观察各组 HepG2 细胞转染效1.2.2 qRT-PCR 检测稳定细胞株中 NFAT mRN图 2 结果显示，阴性对照组与对照组之NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT-表达较对照组及阴性对照组降低，差异有统计表达载体的慢病毒后能有效沉默人肝癌 HeShRNA103 干扰效果最明显，干扰效率最高。VEGFA mRNA 表达较对照组及阴性对照组

D图 1 荧光显微镜观察各组 HepG2 细胞转染1.2.2 qRT-PCR 检测稳定细胞株中 NFAT mR图 2 结果显示，阴性对照组与对照组之NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT表达较对照组及阴性对照组降低，差异有统表达载体的慢病毒后能有效沉默人肝癌 HShRNA103 干扰效果最明显，干扰效率最高VEGFA mRNA 表达较对照组及阴性对照组

图 3 HepG2 各组细胞转染后 VEGFAmRNA1.2.3 Western Bolt 检测各组稳定细胞株中 NF图 4 结果显示，阴性对照组与对照组蛋NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT-ShRN达水平较对照组及阴性对照组降低，其中 ShRNA其干扰效果最明显，干扰效率最高。图 5 结果显示白水平表达较对照组及阴性对照组降低。A B C D
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 王建;沈中阳;郑卫萍;刘涛;宋红丽;;他克莫司在体外对肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15增殖的影响[J];中国中西医结合外科杂志;2014年03期

本文编号：2855889