ChiMYB基因转化野菊的研究
发布时间：2020-10-27 15:46
野菊(Chrysanthemum indicum)为多年生植物,具有抗性强、耐瘠薄、养护粗放、覆盖力强等特点,在城市园林中应用价值较高。在当今城市建筑密集、绿化空间窄小的情况下,立体绿化正在各地广泛应用。立体绿化中重要的基础材料是匍匐植物,匍匐植物在山坡、墙面、屋顶、篱垣、棚架、柱状体、林下绿化及室内装饰等方面具有不可取代的作用,但市场上对匍匐性状的植物种类应用较少。分子育种是一种重要的育种方式,其中,又以转基因育种手段最为成熟,运用这种技术培育菊花品种可能会为匍匐性菊花的获得提供方法。根据本实验室的前期研究结果,野菊ChiMYB基因过表达的烟草植株出现了匍匐性状,本试验欲做出进一步探索,将该基因转入野菊中使其过量表达,观察野菊是否会出现类似性状,并为后期的育种工作奠定基础。主要研究结果如下:1、优化野菊的再生体系。以野菊组织培养苗为试验材料,通过用不同生长调节剂组合对叶片分化的研究,发现在MS+1.0mg/L6-BA+0.8mg/LNAA上,叶片的分化率最高;在遗传转化过程的后期,用抗生素对转化植株进行筛选是必不可少的。本实验确定了8mg/L和10mg/L卡那霉素分别作为叶片分化的筛选压力和野菊生根最适宜的临界浓度,选用200mg/L头抱霉素作为抑菌剂为野菊叶盘分化适宜的临界浓度。抗生素不仅对农杆菌具有抑制作用甚至杀伤威力,而且对野菊的叶盘也有一定的影响。因此试验中要筛选适宜浓度的抗生素,抑制农杆菌和非转化细胞生长的同时,避免影响转化植株的正常生长。2、利用农杆菌介导法将ChiMYB基因转入野菊中,得到过表达ChiMYB基因的转基因野菊植株。结果表明,取继代苗为材料,切成0.5cm×0.5cm的小块,在预培养基:MS+1.0mg/L6-BA+0.8mg/LNAA预培养2d;农杆菌活化至菌液浓度OD_(600)为0.8-1.0后,离心收集菌体并用1/2MS液体培养基稀释菌液浓度OD_(600)为0.2时侵染8min,吸去多余菌液后放入原培养基中暗培养2d后;转入筛选培养基:MS+1.0mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+8mg/LKan+200mg/LCef中,待不定芽长至2cm左右时,用无菌手术刀片将其切下,转移至转基因生根培养基:1/2MS+10mg/LKan培养至生根成苗。3、利用农杆菌介导法将ChiMYB基因和pBI121空载体转入野生型野菊植株体内,通过抗性生根筛选、抗性植株DNA和RNA的PCR检测,证明已成功过获得2株转ChiMYB基因和2株转pBI121空载体的阳性转野菊株系。利用qRT-PCR检测ChiMYB基因在不同野菊株系中的表达量,其在转空载株系和野生型野菊中的表达量相差无几,在转基因株系L1的表达量最高,是野生型野菊的11.2倍,在转基因株系L4的表达量是野生型野菊的6.7倍,表明ChiMYB基因在转基因株系中的表达量均提高。
【学位单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S682.11
【部分图文】：
转基因野菊Fig.1TransgenicChrysanthemumindicumCD
而 10 没有条带为假阳性转基因植株。PCR 验证野菊 DNA 结果显示，实验成功获得2 株转ChiMYB 基因，2 株转 pBI121 空载的野菊。图2 转基因野菊植株DNA 的PCR 鉴定Fig.2 Confirmation of the presence of the transgene by PCR in different transgenic lines M：DL20003、转基因植株 RNA 的检测为了进一步验证 ChiMYB 基因在转基因野菊中的表达情况，提取转基因植株、转空载植株和野生型野菊植株叶片的总 RNA，以反转的 cDAN 为模板，以 ChiMYB-SmaI/ChiMYB-SpeI 特异性引物和 nptII 引物序列进行 PCR，同时以含 pBI121-MYB 重组质粒的农杆菌质粒为模板的阳性对照。检测结果为图3，1是以含 pBI121-MYB 重组质粒的农杆菌质粒为模板的阳性对照，2为是野生型野菊植株，3-4为转 ChiMYB 基因野菊植株
体上的抗性基因已成功整合到野菊基因组上。PCR 验证野菊 RNA 结果显示，实验成功获得2株转 ChiMYB 野菊植株与2株转空载野菊植株。图3 转基因野菊植株RNA 的PCR 鉴定Fig.3 Confirmation of the presence of the transgene by PCR in different transgenic lines M：DL20004、荧光定量的检测ChiMYB 基因在转空载株系和野生型野菊中的表达量相差无几，在转基因株系 L1的表达量最高，是野生型野菊的 11.2 倍，在转基因株系 L4 的表达量是野生型野菊的6.7 倍，ChiMYB 在转基因株系中的表达量均提高。图 4 ChiMYB 基因在不同转基因野菊中的表达Fig.4 Expression of ChiMYB gene in different Transgenic Chrysanthemum indicum2000bp250bp100bp750bp1000bp500bp
【参考文献】
本文编号：2858718
【学位单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S682.11
【部分图文】：
转基因野菊Fig.1TransgenicChrysanthemumindicumCD
而 10 没有条带为假阳性转基因植株。PCR 验证野菊 DNA 结果显示，实验成功获得2 株转ChiMYB 基因，2 株转 pBI121 空载的野菊。图2 转基因野菊植株DNA 的PCR 鉴定Fig.2 Confirmation of the presence of the transgene by PCR in different transgenic lines M：DL20003、转基因植株 RNA 的检测为了进一步验证 ChiMYB 基因在转基因野菊中的表达情况，提取转基因植株、转空载植株和野生型野菊植株叶片的总 RNA，以反转的 cDAN 为模板，以 ChiMYB-SmaI/ChiMYB-SpeI 特异性引物和 nptII 引物序列进行 PCR，同时以含 pBI121-MYB 重组质粒的农杆菌质粒为模板的阳性对照。检测结果为图3，1是以含 pBI121-MYB 重组质粒的农杆菌质粒为模板的阳性对照，2为是野生型野菊植株，3-4为转 ChiMYB 基因野菊植株
体上的抗性基因已成功整合到野菊基因组上。PCR 验证野菊 RNA 结果显示，实验成功获得2株转 ChiMYB 野菊植株与2株转空载野菊植株。图3 转基因野菊植株RNA 的PCR 鉴定Fig.3 Confirmation of the presence of the transgene by PCR in different transgenic lines M：DL20004、荧光定量的检测ChiMYB 基因在转空载株系和野生型野菊中的表达量相差无几，在转基因株系 L1的表达量最高，是野生型野菊的 11.2 倍，在转基因株系 L4 的表达量是野生型野菊的6.7 倍，ChiMYB 在转基因株系中的表达量均提高。图 4 ChiMYB 基因在不同转基因野菊中的表达Fig.4 Expression of ChiMYB gene in different Transgenic Chrysanthemum indicum2000bp250bp100bp750bp1000bp500bp
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 皮伟;李名扬;;根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究[J];西南大学学报(自然科学版);2007年04期
2 唐巍;菊花离体快速繁殖的研究[J];生物技术;1993年02期
本文编号：2858718
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2858718.html
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