骨碎补总黄酮对大鼠肝脏铁调素基因表达的影响

发布时间：2020-11-08 20:44

　　 目的:探究骨碎补总黄酮(RDTF)对骨质疏松(OP)大鼠的疗效,并通过ELISA、RT-PCR、免疫组化等方法探究RDTF对大鼠肝脏铁调素(HEPC)基因表达的影响。方法:选取60只成年SD雌性大鼠,随机分为20只假手术(SHAM)组,40只去卵巢(OVX)组,采用经典的去势法切除其双侧卵巢,制备OP模型,SHAM组切取同体积脂肪组织。常规饲养3个月后随机抽取SHAM组10只、OVX组10只大鼠处死。检测造模成功后,再次将OP模型大鼠随机分为3组,分别为去势空白组(OVX+B)、中药低剂量组(OVX+L)、中药高剂量组(OVX+H),每组10只。两个中药组分别予以RDTF(低剂量组100mg/kg/d,高剂量组200mg/kg/d)灌服,对照及模型组灌服同体积的双蒸水。4周后取血,肝脏和右侧股骨,进行血清学、基因学、骨组织形态及病理学等方面的检测:①检测骨密度(BMD);②检测血清钙、铁的含量;③ELISA测定血清HEPC的含量;④RT-PCR测定肝脏HEPC mRNA的表达;⑤光镜观察经HE染色的股骨中段切片;⑥免疫组化检测BMP-6在肝脏的表达情况。结果:①检测 BMD 值:SHAM 组OVX+H 组OVX+L 组OVX+B 组。SHAM 组与 OVX+H 组比较,差异无统计学意义(P0.05);其余各组两两比较,差异均具有统计学意义(p0.05)。②三组血清钙水平低于假手术组,差异均具有统计学意义(P0.05),而这三组组间比较,差异均不具有统计学意义(P0.05);血清铁情况完全相同。③血清HEPC含量:SHAM组、OVX+L组高于OVX+B组、OVX+H组,差异有统计学意义(P0.05);SHAM组与OVX+L组差异不具有统计学意义(P0.05);OVX+B组与OVX+H组差异也不具有统计学意义(P0.05)。④肝脏HEPC mRNA相对定量结果:OVX+H组SHAM组OVX+L组OVX+B组。SHAM组、OVX+L组、OVX+H组与OVX+B组比较,差异有统计学意义(P0.05);OVX+L组、OVX+H组与SHAM组比较,差异无统计学意义(P0.05);OVX+L组与OVX+H组比较,差异有统计学意义(P0.05)。⑤光镜观察HE切片:骨板致密程度:SHAM组OVX+H组OVX+L组OVX+B组;骨凹陷大小:OVX+B组OVX+L组OVX+H组＞SHAM组;骨细胞数目:SHAM组OVX+H组OVX+L组OVX+B组;皮质表面平整度:SHAM组OVX+H组OVX+L组OVX+B组。⑥肝脏BMP-6免疫组化结果:BMP-6阳性表达率:OVX+H组SHAM组OVX+L组OVX+B组。SHAM组与OVX+H组比较,差异无统计学意义(P0.05);其余各组两两比较,差异均具有统计学意义(p0.05)。结论:①RDTF对大鼠OP有改善作用,且量效关系成正比。②OVX能够降低血清钙、铁的含量,但RDTF并不能影响血清钙、铁的水平。③RDTF对大鼠血清HEPC含量有影响,在低浓度时促进血清HEPC的表达,高浓度时效果效果不显。④OVX能够抑制肝脏HEPC的表达,而RDTF能上调肝脏HEPC的表达,且量效关系成正比。⑤RDTF能够上调肝脏BMP-6的表达,且量效关系成正比。
【学位单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
前言
第一部分 理论研究
    1. 祖国医学对骨质疏松的研究
        1.1 骨质疏松的中医病名
        1.2 骨质疏松的病因病机
        1.3 中医治疗骨质疏松的研究进展
    2. 传统中药骨碎补的研究进展
        2.1 骨碎补的现代药理学研究
        2.2 骨碎补总黄酮改善骨质疏松作用机制研究
    3. 铁调素的研究进展
        3.1 铁调素的生成和调节机制
        3.2 铁调素改善骨质疏松的相关机制
第二部分 实验研究
    1. 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验仪器
        1.3 实验药品及试剂
    2. 实验方法
        2.1 骨质疏松动物模型的建立
        2.2 分组及给药
        2.3 实验样本的采集
        2.4 实验指标及检测途径
        2.5 统计学处理
    3. 实验结果的分析
        3.1 股骨骨密度值分析
        3.2 血清钙、铁含量的分析
        3.3 血清铁调素含量的分析
        3.4 肝脏铁调素mRNA表达结果的分析
        3.5 骨组织HE染色切片的观察
        3.6 肝脏中BMP-6表达结果的分析
第三部分 讨论
    1. 不同造模方法的优劣比较
    2. 骨碎补总黄酮调控铁调素机制探讨
    3. 药物治疗骨质疏松回顾与展望
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的学术成果
致谢

【参考文献】

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本文编号：2875312