miR-335靶向EphA4基因干预乳腺癌细胞增殖转移的实验研究
发布时间:2020-11-12 20:22
研究背景:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度在18-22个核苷酸,调控基因表达和转录的非编码RNA。MiRNA不仅参与正常细胞的生长及信号转导过程,也参与肿瘤细胞的生物调控。miR-335转录自人常染色体7q32.2,研究证实,miR-335参与癌细胞的增殖、迁移、侵袭等过程,并能抑制乳腺癌的发生发展。EphA4是促红细胞生成素肝细胞(erythropoietin-producinghuman epato-cellular,Eph)受体家族成员,实验发现:与良性乳腺肿瘤比较,乳腺癌组织EphA4高表达,提示EphA4与乳腺癌发生相关。作为上游调控因子,miR-335对乳腺癌发生的抑制效应是否通过干预EphA4表达而实现,目前未见相关报道。因此,本研究以乳腺癌细胞为观测对象,从miR-335-EphA4靶向关系、miR-335与EphA4表达调控、miR-335-EphA4信号关联对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭干预等角度,分析EphA4靶向与miR-335抑癌作用的联系,阐释miR-335干预乳腺癌发生发展的可能作用。结果:1.应用miRBase,TargetScan和PicTar分析,预测到EphA4基因可能为miR-335的下游靶基因。2.构建EphA4野生型(wild type,WT)和突变型(mutation type,MUT)双荧光素酶报告载体,并将其与miR-335 mimics分别共转染雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性乳腺癌细胞MCF-7,和雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,发现共转染显著降低野生型EphA4荧光活性,而对突变型EphA4荧光活性无影响,提示EphA4与miR-335存在靶向效应。3.实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫印迹(Western blotting,WB)实验结果显示,miR-335 mimics转染显著抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞EphA4表达,提示miR-335负向调控EphA4表达。4.MTT细胞增殖实验结果显示,miR-335抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖,但该作用可被EphA4高表达限制,提示miR-335的细胞增殖抑制效应与下调EphA4相关。5.划痕和Transwell实验结果显示,EphA4促进MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭转移,miR-335则表现明显的抑制乳腺癌细胞侵袭转移效应,但EphA4高表达则显著对抗miR-335对乳腺癌细胞活动的抑制效应,提示miR-335的细胞侵袭转移抑制效应与下调EphA4相关。结论:1.EphA4是miR-335的下游靶基因。2.miR-335负向调控EphA4表达。3.EphA4促进乳腺癌细胞增殖、转移。4.miR-335通过下调EphA4发挥抑制乳腺癌细胞增殖和转移的效应。
【学位单位】:云南大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2018
【中图分类】:R737.9
【部分图文】:
图2.1双荧光素报告载体
miR-335茎环结构
miRNA合成过程模式图
【参考文献】
本文编号:2881203
【学位单位】:云南大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2018
【中图分类】:R737.9
【部分图文】:
图2.1双荧光素报告载体
miR-335茎环结构
miRNA合成过程模式图
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本文编号:2881203
本文链接:https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2881203.html
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