Thlaspi goesingense SAT基因转化埃塞俄比亚芥及对镍耐性影响研究

发布时间：2020-11-18 19:17

【摘要】：埃塞俄比亚芥(Brassicacarinata)是十字花科芸薹属植物,但在自然条件下与食用甘蓝型油菜很难杂交,可望培育成为新的工业用油料作物用于污染土壤修复。在非超积累植物中超量表达外源的丝氨酸乙酰转移酶(SAT),可以显著提高该植物GSH含量和对重金属的抗性。本论文以埃塞俄比亚芥为遗传转化材料,将菥蓂属Thlaspi goesingense的丝氨酸乙酸转移酶(Serine Acetyltransferase,SAT)基因通过农杆菌介导的遗传转化方法转入埃塞俄比亚芥子叶中,诱导愈伤出新的幼芽后经卡那霉素初步筛选,淘汰紫化和白化苗,绿色健康的转化苗进行生根培养后移入盆中。用SDS法对其进行DNA抽提,利用NptⅡ引物进行PCR鉴定后,筛选出的苗于开花前进行套袋,收取种子。第二年种下T1代种子,待长出真叶后进行NptⅡ鉴定,标记出相应编号,花期套袋,单株收取种子,为T2代种子。对T2代幼苗进行NptⅡPCR鉴定鉴定,确定 4-8、8-19、4-5、8-16、1-23、3-9、1-27、7-15 等编号 T2 代转基因频率均超过 50%,最高为67%。用硫酸镍处理埃塞俄比亚芥种子,观察幼苗生长情况,结果表明:各转基因品系种子萌发率率与野生型差异均不显著;3-9、6-10的相对存活率显著高于野生型;4-5、6-10、1-23、8-18相对根长显著高于野生型,其余品系与野生型差异不显著;6-10、6-17相对苗长显著高于野生型,其他品系与野生型差异不显著;7-15、4-8、6-10、7-11、4-5、6-17、1-27、3-9、1-23、8-18、8-16的相对鲜重显著高于野生型,其余品系与野生型差异不显著。6-10在存活率、根长、苗长、鲜重四个方面,均表现除对镍良好的耐性。对T2代73棵埃塞俄比亚芥幼苗进行PCR鉴定,发现转基因苗总数为36棵,其叶绿素A平均值为0.725,平均叶绿素B为0.355,叶绿素A和叶绿素B之比为2.063;非转基因苗总共37棵,其叶绿素A平均值为0.685,平均叶绿素B为0.363,叶绿素A和叶绿素B之比为1.920。转基因苗叶绿素A较非转基因苗高5.84%,叶绿素B较非转基因苗低2.20%,叶绿素A/B较非转基因苗高7.45%。这一结果初步表明转SAT基因对埃塞俄比亚芥的耐镍性有一定提高。
【学位授予单位】：湖北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：Q943.2
【图文】：

图１．１埃塞俄比亚芥顶生芽、花序、角果、种子??埃塞俄比亚芥虽然和油菜等同为芸薹属植物，但是埃塞俄比亚芥本身无需春化干旱。埃塞俄比亚芥茎秆为非直立茎，茎秆粗壮，侧枝很多，腋生花絮长势旺盛，花而上盛，塞比亚，，呈色，

合到植物基因组上。农杆菌转化宿主细胞的过程中，诱导农杆菌激活的趋化蛋白和??Ｔ－ＤＮＡ进入细胞后相关蛋白的协同作用是转化成功与否的重要因素。农杆菌Ｔ－ＤＮＡ转??化植物细胞过程见图１．２。??１１??

图３．１埃塞俄比亚芥遗传转化??ａ：种子萌发ｂ：两片子叶打开、ｃ：预培养、ｄ：共培养、ｅ：诱导愈伤??ｆ：扩繁培养、ｇ：生根后移栽、ｈ：成苗??
【参考文献】

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本文编号：2889099