EIF3D基因对于胆管癌细胞增殖迁移能力影响

发布时间：2020-12-04 23:21

　　目的:胆管癌是一种起源于胆管上皮细胞的,发病率位于原发性肝癌第二位的恶性肿瘤,由于其缺乏早期诊断指标及易早期侵袭的特点,导致胆管癌死亡率高居不下。eIF3d基因是一种在翻译起始阶段起重要作用的基因,目前已经有很多关于eIF3d基因在肿瘤中的研究,并且它被发现有不同程度的促癌作用,然而其在胆管癌发病过程中起到的作用尚未明确。本研究主要通过慢病毒转染技术敲减胆管癌细胞中eIF3d基因的表达,进而研究其对于胆管癌细胞株增殖,迁移,及细胞周期,细胞体内成瘤情况的影响。从而探讨e IF3d基因能否影响胆管癌细胞生长及在细胞生长中发挥的作用,推测其对胆管癌发生发展的影响。方法:1.构建慢病毒并转染获得稳定的低表达eIF3d基因的胆管癌HCC-9810及RBE细胞系。2.进行体外细胞实验如,克隆形成实验,MTT实验,Transwell实验,验证了体外eIF3d基因对于胆管癌细胞增殖迁移影响,流式细胞仪检测敲减eIF3d基因对于胆管癌细胞周期的影响。通过Western-blot（过蛋白印记实验）检测细胞转移及周期相关蛋白表达改变情况。3.设计体内实验,构建裸鼠成瘤模型,探究eIF3d基因在裸鼠体内对胆... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pLKO.1–TRC质粒DNA图谱

图 2. (A)慢病毒转染 48h 后镜下观测到的绿色荧光蛋白显色情况。（B）Western-bolt 实验检测 eIF3d 在 eIF3d 敲减病毒（shRNA-eIF3d）组及转染空质粒慢病毒对照组（Control）分别HCCC-9810 及 RBE 的表达情况我们通过使用慢病毒转染技术，分别于胆管癌 HCCC-9810 及 RBE 细胞系中转染 eIF3d 敲减病毒（shRNA-eIF3d）及空质粒慢病毒（Control）,同时在慢病毒转染后的 48 小时观察细胞中 GFP（绿色荧光蛋白）的表达情况来推测其转染效率（结果如图 2 所示），两株细胞均达到很好的转染效率。接着通过 Western-bolt进一步验证 eIF3d 敲减病毒（shRNA-eIF3d）的敲减效率，对敲减组细胞及其对照组进行检测，从而进一步对慢病毒转染后的实际敲减效率进行验证，Western-bolt 结果显示，与对照组相比，eIF3d 敲减病毒组的蛋白表达水平明显降低。通过使用慢病毒转染法获得了较高的转染效率，并且能够有效的降低其在细胞中的表达量，同时获得了稳定低表达 eIF3d 基因的胆管癌 HCCC-9810 及 RBE 细胞系。

山西医科大学（博）硕士学位论文2.2 抑制 eIF3d 基因可以显著抑制胆管细胞体外增殖能力。由于很多研究都发现了eIF3d基因在肿瘤发生发展中起促进作用，基于这些，我们推测 eIF3d 基因很可能在胆管癌细胞增殖和运动侵袭中起到了一定的调控促进功能。为了验证 eIF3d 对于胆管癌细胞增殖能力的影响，我们设计了两个实验分别从细胞群及单个细胞验证其对于胆管癌细胞增殖能力的影响


本文编号：2898417