斑马鱼Per1a对行为节律和核心生物钟基因表达的调节机制

发布时间：2020-12-15 05:27

　　Period（Per）作为典型的生物钟基因,在果蝇,斑马鱼和小鼠中是高度保守的。虽然果蝇的per基因只有一个,但哺乳动物有三个Per基因,分别为Per1、Per2、Per3。斑马鱼的per基因有四个,per1a、per1b、per2和per3,其中per1a和per1b是哺乳动物Per1的共同直向同源基因,并来自于硬骨鱼类第三次基因组复制（TGD）。本实验室已对斑马鱼per1b基因在生物钟中的功能进行了系统性的分析,但是per1a在生物钟中的功能尚不清楚。为了验证per1a是否受到生物钟的调控,通过荧光实时定量PCR结果显示,per1a基因在野生型斑马鱼中的表达具有节律性,并且在clock1a纯合突变体中表达下调。为了验证per1a对生物钟的调控作用,我们利用实验室已有的per1a纯合突变体（per1a-/-）,在持续黑暗（DD）条件下,该纯合突变体的幼鱼行为的周期、相位和振幅与野生型的相比并没有显著差异但是在持续光照（LL）条件下,周期不变,振幅减小,相位前移。并且我们构建了松果体特异性敲除per1a的转基因鱼系Tg（U6x:sgRNA（per1a）:LC）;Tg（exorh:Cas... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

per1a基因是有生物钟节律的并受生物钟调控

的per1a对斑马鱼的行为节律没有影响（A）松果体):LC)）转基因鱼系荧光图片。在持续黑暗（DD）（D）和相位（E）进行分析。(E) 收取的正常光基因鱼系在下的行为。（F）正常光暗条件（LD）基因鱼系的总的活动量。在持续光照（LL）条件相位（J）进行分析。对照组为蓝色线条，松果体性分析*代表 P<0.05，**代表 P<0.01，***因在全身敲除的 per1a 纯合突变体鱼 per1a 基因对斑马鱼幼鱼的自主行为节有两个，即 per1a 和 per1b，可能是因为的作用。为了进一步检测 per1a 的纯合突

a 转录组分析（A）per1a 纯合突变体与野生型在 CT2 和 CT12 时差异表差异性表达基因数目分析，81 个基因在 CT2 和 CT12 都有表达，蓝色代T12。（B）在 CT2 时生物钟核心基因 per1a,per1b,per2,per3 发生变化。生物钟节律过程有很大的变化。（D）在 CT12 时，生物钟节律过程的变头代表生物钟节律过程。5. 生物钟基因在全身敲除的 per1a 纯合突变体中是下高通量测序的结果，我们利用 qRT-RCR 来检测 per1a 纯合突基因的表达水平。首先把受精的斑马鱼胚胎置于鱼房正常的光主生物钟的形成，在胚胎受精后第 5 天（96 hpf）开始收集样不同的光照条件，每隔 4 个小时采集一次样本，每次收集 30 结束，共 24 小时，7 个时间点收取正常光暗 LD 条件下的样品件下的样品则是受精后前 72 小时处于正常的光暗条件，在 7


本文编号：2917736