棉大卷叶螟丝素P25基因的克
发布时间：2020-12-15 08:53
棉大卷叶螟(Sylepta derogata Fabricius)属鳞翅目螟蛾科,是一种分布广泛的多食性害虫。为了深入了解棉大卷叶螟的吐丝机理,本文研究了棉大卷叶螟丝素P25基因,通过基因克隆技术得到其cDNA序列全长,并检测分析在不同发育阶段、取食不同寄主后棉大卷叶螟丝素P25基因的相对表达量。以此为基础,进行RNA干扰试验,采用饲喂法干扰其丝素P25基因的表达,从而进行功能验证。主要研究结果如下:1、通过比对其他已知的鳞翅目昆虫的丝素P25基因,运用RACE法克隆得到棉大卷叶螟丝素P25基因全长。棉大卷叶螟丝素P25基因cDNA全长为859bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAG,编码区全长为663bp,并将所获得的基因全长提交到GenBank,登录号为KY792994。依据棉大卷叶螟丝素P25基因的核苷酸序列转换为其氨基酸序列,并加以分析,估算该蛋白分子量为25.653kDa,等电点pI为8.02。将所获得的基因全长同已经登录到GenBank的其他昆虫丝素P25基因序列进行同源性比对,与大蜡螟(Galleria mellonella)的同源性最高,达到63%,其次为外米缀蛾(...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１棉大卷叶螟丝素基因中间片段ＰＣＲ扩增结果??
２．?８．?２?３’?ＲＡＣＥ扩增结果??以棉大卷叶螟总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用已设计好的３’?ＲＡＣＥ特异性引物??进行巢氏ＰＣＲ扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，结果见图２－２。片段大小在３５０ｂｐ??左右，符合预期。切下胶块，经胶回收纯化后与ＰＭＤ－１８Ｔ相连，连接产物转化至大肠杆??菌ＤＨ５?ａ感受态细胞中，挑取单菌落进行菌液ＰＣＲ，将含有特异目的基因的单克隆菌液送??至上海生工生物工程有限公司测序。测序结果表明该序列长３５７ｂｐ。??Ｍ??／６００Ｑ?＾ｍ：??％ＳＯＯＯ??０４０００??／Ｖ３５００??二１２００??＾ｌ〇０°?Ｉ??＞－７００??ｓ＾６０Ｑ?Ｃ??图２－２棉大卷叶螟丝素没５基因３’?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ扩增结果??２．?８．?３?５’?ＲＡＣＥ扩增结果??以棉大卷叶螟总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用已设计好的两对５’端特异性引物??分别进行巢氏ＰＣＲ扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，结果如图所示。片段大小均??在２００ｂｐ左右，符合预期。切下胶块，经胶回收纯化后与ｐＭＤ－１８Ｔ相连，连接产物转化??至ＳＫ２３０１感受态细胞中，挑取单菌落，以ｐＭＤ１８－Ｔ载上的通用引物做ＰＣＲ，将含有特异目??的基因的单克隆菌液送至上海生工生物工程有限公司测序。测序结果表明该序列长３７０ｂｐ。??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]不同寄主对棉大卷叶螟第4代种群增长的影响[J]. 陆佩玲,陈建,武二忠,苏宏华,杨益众. 棉花学报. 2011(03)
[2]昆虫的RNA干扰[J]. 杨广,尤民生,赵伊英,刘春辉. 昆虫学报. 2009(10)
[3]昆虫RNAi技术及其应用[J]. 何正波,陈斌,冯国忠. 昆虫知识. 2009(04)
[4]棉大卷叶螟的年生活史与种群动态[J]. 陈建,杨进,陆佩玲,施敏娟,杨益众. 植物保护. 2008(03)
[5]棉大卷叶螟危害损失的初步研究[J]. 狄佳春,陈旭升,吴巧娟,许乃银,肖松华,刘剑光,殷剑美. 江苏农业科学. 2007(05)
[6]三种转基因抗虫棉对棉大卷叶螟的抗性[J]. 黄东林,刘汉勤. 江苏农业学报. 2005(02)
[7]转Bt基因棉对棉大卷叶螟种群动态的影响[J]. 刘芳,杨益众,陆宴辉,康晓霞,余月书,陈建,吴洁云,万年峰. 昆虫知识. 2005(03)
[8]昆虫的丝和丝腺[J]. 王孟卿,彩万志. 昆虫知识. 2004(01)
[9]转Bt基因抗虫棉对棉大卷叶螟抗性的研究[J]. 王厚振,肖云丽,郑成民,王书友,孟妍遐. 植保技术与推广. 2002(03)
[10]蚕丝纤维组成的研究[J]. 黄君霆. 蚕桑通报. 2001(04)
硕士论文
[1]棉大卷叶螟对棉花和苘麻的偏好性评价[D]. 陈玲.扬州大学 2014
本文编号：2918011
【文章来源】：扬州大学江苏省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１棉大卷叶螟丝素基因中间片段ＰＣＲ扩增结果??
２．?８．?２?３’?ＲＡＣＥ扩增结果??以棉大卷叶螟总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用已设计好的３’?ＲＡＣＥ特异性引物??进行巢氏ＰＣＲ扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，结果见图２－２。片段大小在３５０ｂｐ??左右，符合预期。切下胶块，经胶回收纯化后与ＰＭＤ－１８Ｔ相连，连接产物转化至大肠杆??菌ＤＨ５?ａ感受态细胞中，挑取单菌落进行菌液ＰＣＲ，将含有特异目的基因的单克隆菌液送??至上海生工生物工程有限公司测序。测序结果表明该序列长３５７ｂｐ。??Ｍ??／６００Ｑ?＾ｍ：??％ＳＯＯＯ??０４０００??／Ｖ３５００??二１２００??＾ｌ〇０°?Ｉ??＞－７００??ｓ＾６０Ｑ?Ｃ??图２－２棉大卷叶螟丝素没５基因３’?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ扩增结果??２．?８．?３?５’?ＲＡＣＥ扩增结果??以棉大卷叶螟总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用已设计好的两对５’端特异性引物??分别进行巢氏ＰＣＲ扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，结果如图所示。片段大小均??在２００ｂｐ左右，符合预期。切下胶块，经胶回收纯化后与ｐＭＤ－１８Ｔ相连，连接产物转化??至ＳＫ２３０１感受态细胞中，挑取单菌落，以ｐＭＤ１８－Ｔ载上的通用引物做ＰＣＲ，将含有特异目??的基因的单克隆菌液送至上海生工生物工程有限公司测序。测序结果表明该序列长３７０ｂｐ。??
２．?８．?２?３’?ＲＡＣＥ扩增结果??以棉大卷叶螟总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用已设计好的３’?ＲＡＣＥ特异性引物??进行巢氏ＰＣＲ扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，结果见图２－２。片段大小在３５０ｂｐ??左右，符合预期。切下胶块，经胶回收纯化后与ＰＭＤ－１８Ｔ相连，连接产物转化至大肠杆??菌ＤＨ５?ａ感受态细胞中，挑取单菌落进行菌液ＰＣＲ，将含有特异目的基因的单克隆菌液送??至上海生工生物工程有限公司测序。测序结果表明该序列长３５７ｂｐ。??Ｍ??／６００Ｑ?＾ｍ：??％ＳＯＯＯ??０４０００??／Ｖ３５００??二１２００??＾ｌ〇０°?Ｉ??＞－７００??ｓ＾６０Ｑ?Ｃ??图２－２棉大卷叶螟丝素没５基因３’?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ扩增结果??２．?８．?３?５’?ＲＡＣＥ扩增结果??以棉大卷叶螟总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，利用已设计好的两对５’端特异性引物??分别进行巢氏ＰＣＲ扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物，结果如图所示。片段大小均??在２００ｂｐ左右，符合预期。切下胶块，经胶回收纯化后与ｐＭＤ－１８Ｔ相连，连接产物转化??至ＳＫ２３０１感受态细胞中，挑取单菌落，以ｐＭＤ１８－Ｔ载上的通用引物做ＰＣＲ，将含有特异目??的基因的单克隆菌液送至上海生工生物工程有限公司测序。测序结果表明该序列长３７０ｂｐ。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同寄主对棉大卷叶螟第4代种群增长的影响[J]. 陆佩玲,陈建,武二忠,苏宏华,杨益众. 棉花学报. 2011(03)
[2]昆虫的RNA干扰[J]. 杨广,尤民生,赵伊英,刘春辉. 昆虫学报. 2009(10)
[3]昆虫RNAi技术及其应用[J]. 何正波,陈斌,冯国忠. 昆虫知识. 2009(04)
[4]棉大卷叶螟的年生活史与种群动态[J]. 陈建,杨进,陆佩玲,施敏娟,杨益众. 植物保护. 2008(03)
[5]棉大卷叶螟危害损失的初步研究[J]. 狄佳春,陈旭升,吴巧娟,许乃银,肖松华,刘剑光,殷剑美. 江苏农业科学. 2007(05)
[6]三种转基因抗虫棉对棉大卷叶螟的抗性[J]. 黄东林,刘汉勤. 江苏农业学报. 2005(02)
[7]转Bt基因棉对棉大卷叶螟种群动态的影响[J]. 刘芳,杨益众,陆宴辉,康晓霞,余月书,陈建,吴洁云,万年峰. 昆虫知识. 2005(03)
[8]昆虫的丝和丝腺[J]. 王孟卿,彩万志. 昆虫知识. 2004(01)
[9]转Bt基因抗虫棉对棉大卷叶螟抗性的研究[J]. 王厚振,肖云丽,郑成民,王书友,孟妍遐. 植保技术与推广. 2002(03)
[10]蚕丝纤维组成的研究[J]. 黄君霆. 蚕桑通报. 2001(04)
硕士论文
[1]棉大卷叶螟对棉花和苘麻的偏好性评价[D]. 陈玲.扬州大学 2014
本文编号：2918011
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