基于新型核酸扩增技术的高灵敏度microRNA及基因突变分析

发布时间：2020-12-16 18:39

　　基因组DNA转录形成RNA,再由RNA翻译形成蛋白质是生命活动的基本过程,对细胞的生长、代谢和凋亡起着重要作用。核酸作为调控生理活动的基本遗传物质,携带着生命活动的遗传信息,对所有生物体的生长、发育、遗传和变异等重大生命现象起着决定性作用。其中,microRNA是一类内源性的、非编码的长度相对较短的小RNA,microRNA通过与目标信使RNA（mRNA）特异结合从而抑制蛋白翻译或诱导mRNA降解,在调控基因表达、细胞增殖分化凋亡过程等方面发挥着重要作用,其表达含量异常与多种疾病尤其是癌症的发生密切相关。另外,由单核苷酸多态性（SNPs）所引起的基因突变,通常可引起一定的表型变化,SNPs的分析检测在致病机理研究、基因功能研究以及个性化用药等方面具有重要意义。此外,特定位点的mRNA突变直接决定了翻译蛋白的功能,与包括癌症在内的多种疾病的发展密切相关,近年来肿瘤相关mRNA突变作为评估肿瘤细胞在生物体内或血液中迁移的特异性生物标志物得到高度重视。因此microRNA及基因突变的检测对基因功能研究和以其作为生物标志物的遗传病学研究、疾病诊断尤其是癌症的早期诊断与治疗等都具有十分重要的意义... 

【文章来源】：陕西师范大学陕西省 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

通过偶联RCA反应和多重转录检测microRNA[57]

?１７３??３５０?４００?４５０?５００?５５０?６００??图１－１０全自动样品制备微系统用于基因检测［９８］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１０?Ｆｕｌｌｙ?ａｕｔｏｍａｔｅｄ?ｓａｍｐｌｅ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍ?ｆｏｒ?ｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｅｓｔｉｎｇ??１．２．１．３基于测序技术检测ＳＮＰｓ??ＤＮＡ测序（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）?［９９＿１Ｇ４］是指分析研宄特定的基因组序列中４种碱基??Ａ?（腺嘌呤）、Ｇ?（鸟嘌呤）、Ｃ?（胞嘧啶）和Ｔ?（胸腺嘧啶）的排列组合方式，通??过对待检测的样本中同一基因片段进行测序并比对，可以直接确定所检测的位点??是否发生突变。ＤＮＡ测序是相对最容易的ＳＮＰｓ检测方法，在现有的各类分析检??１０??

？?Ｑ?Ａ?Ａ?；?Ｇ?ｃ?Ａ?Ａ?ＩＴ＊＊?ＯＣ?ＡＵ??＾?ｉ?ｉ?Ｊ??ｗａｒ？．?ｉ?ＡＩＴＰＲ?ｊ?９??ｗ?Ｏｆ?Ｕ，Ｕｔｐ－ｃ＾?＾?）?ｔ?ＣＴ?Ｉ??１?？?３??ＦＲＥＴ－５?３：?ｈ？ｎ？ｒ＾ｘ？?Ａ??？?ｒ＾ｆＴ?２．?ｈｆｉ＾ｒｅｉｒ／＾ｘｊｓ?＜ｉ；Ａ??１！?ｎ?－?１°？??：卜⑴會??＇?ｊ?ｏｒ?｜?ｏｆ?＾?ｈｒ?＾?＞００?ｎｍ??图１－９基于单碱基延伸的ＳＮＰｓ基因分型Ｉ９７】??Ｆｉｇｕｒｅ?１－９?ＳＮＰｓ?ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ?ａｓｓａｙ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ｓｉｎｇｌｅ?ｂａｓｅ?ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ??Ｚｈｕａｎｇ等＿将ＤＮＡ提取、ＰＣＲ微芯片和控制仪表组装成一个全自动的微??系统用于人全血的基因检测，其原理如图卜１０所示：将ＤＮＡ提取和ＰＣＲ整合??到１５?ＭＬ的微反应室中，并嵌入一块滤纸用于捕获基因ＤＮＡ，无需洗脱直接对??目标ＤＮＡ进行原位ＰＣＲ扩增，最后使用便携式微芯片毛细管电泳系统进行电??泳分析完成检测。该微系统成功实现全自动化，且价格低，同时通过使用双色多??重等位基因特异性ＰＣＲ，将该微系统模型直接从血液中检测导致遗传性听力损??失的３个ＧＪＢ２基因突变，这对于发展“样品问答”（ｓａｍｐｌｅ－ｉｎ－ａｎｓｗｅｒ－ｏｕｔ）微??系统进行快速核酸分析迈出了重要的一步。??


本文编号：2920602