油棕长链脂肪酰基CoA合成酶(LACS)基因克隆及功能分析

发布时间：2020-12-16 23:58

　　油棕的果实含油量极高,占干重质量可达90%,被誉为“世界油王”,长链脂肪酰基 CoA 合成酶（long chain long-chain acyl-CoA synthetase,LACS）将游离的脂肪酸活化,生成脂肪酰基CoA,进而在高等植物的油脂合成和降解途径中发挥重要的功能。在本研究中,我们成功从油棕中克隆到了油棕LACS蛋白家族中的基因EgLACS1和EgLACS9。这些克隆都包含一个高度保守AMP结合域,一个ACS信号基序和一个特殊的连接区域。进化树显示,EgLACS1与AtLACS1,BnLACS1和AhLACS1属于同一个分支,主要参与植物的超长链脂肪酸（VLCFA）合成蜡和角质,这也说明EgLACS1可能参与了油脂的合成。EgLACS9和AtLACS9,BnLACS9和GmLACS9等属于同一个分支,主要参与质体到内质网的转运。酵母互补实验证明了EgLACS 和EgLACS9编码的长链脂肪酰基辅酶A合成酶能够补偿酵母YB525由于缺乏Faa1和Faa4编码蛋白而失去的功能。浅蓝菌素作用的条件下,在培养基中分别添加棕榈酸（C16:0）、硬脂酸（C18:0）或油酸（C18:1... 

【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

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图３．１基因表达分析和克隆结果??Ｆｉｇ?３．１?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｃｌｏｎｉｎｇ??

Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ和作为对照的含有空载的ＹＢ５２５菌株，并向培养基中??添加２５ｐｍ浅蓝菌素抑制剂，和这三种不同的游离脂肪酸，在酵母细胞从０天到??４天的时间里，每隔２４ｈ，测定一次ＯＤ＿。如图３．３Ｃ－Ｄ，?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ的生长速度明显高于对照组，而ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－??Ｖ２ｏｘ蛋白对游离脂肪酸Ｃｌ６，?Ｃｌ８柱和Ｃｌ?８的利用无显著性差异。??３．１．４?ＥｇＬＡＣＳｌ对长链脂肪酸荧光类似物的吸收??为了进一步确定ＥｇＬＡＣＳｌ在酵母中是否和Ｆａｔｌｐ?—起完成脂肪酸的转运，??我们向己经被诱导的的酵母中添加５ｐＭ的脂肪酸荧光类似物ＣＶＢＯＤＩＰＹ－Ｃｕ。??反应后

Ａ．?ＹＢ５２５?ｈａｒｂｏｒｉｎｇ?ｅｍｐｔｙ?ｖｅｃｔｏｒ?Ｂ．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ??Ｃ．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ?Ｄ．?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ??此外也对荧光强度进行了定量测量，如图３．４?Ｄ，ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ菌体的荧光强度是ＹＢ５２５空载体的１．８和２倍，ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ??和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２〇Ｘ两个过表达株之间没有显著性差异。??３．１．５?ＥｇＬＡＣＳｌ脂质和脂肪酸含置??为了确定探讨ＥｇＬＡＣＳｌ蛋白是否参与脂类和脂肪酸的生物合成，对??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ和对照ＹＢ５２５?（ＥＶ）酵母用半乳糖诱导１８－??２０ｈ后，脂质含量通过苏丹黑Ｂ染色法测量。如图３．５?Ａ，与对照组相比，ＥｇＬＡＣＳ?１?－??Ｖ１?ｏｘ和ＥｇＬＡＣＳ?１?－Ｖ２ｏｘ脂质含量的增加。??２２??


本文编号：2921025