斑马鱼TBK1L功能研究与草鱼P47PHOX/P40PHOX基因克隆
发布时间：2020-12-17 09:46
TANK结合激酶1（TBK1）是一种对TRL和RIG-I介导的MAVS依赖的抗病毒免疫相关信号通路中发挥作用的关键激酶,并且是诱导I型IFN产生和宿主抗病毒反应必备的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。本文研究的TBK1样转录子即TBK1L是从斑马鱼克隆而来。相对比TBK1而言,TBK1L含有一个不完全的STKc结构域,缺少UBLTBK1结构域。实时定量PCR结果显示:TBK1L在胚胎、初孵的鱼卵及ZF4细胞中持续表达,当用ssRNA病毒鲤春病毒血症病毒（SVCV）刺激ZF4细胞,TBK1L表达量并没有改变。在斑马鱼胚胎或ZF4细胞中TBK1的过表达能显著诱导斑马鱼IFN1和IFN3启动子的激活,而TBK1L的过表达却不能导致斑马鱼IFN1和IFN3启动子的激活。同样,在CPE细胞中转染TBK1具有抗SVCV效果,TBK1L却无抗病毒作用。然而过表达的TBK1L却能在RLRs、MAVS和TBK1的介导下抑制斑马鱼IFN1或IFN3启动子激活。此外,斑马鱼胚胎细胞中过表达TBK1能够诱导IFN激活基因（ISGs）的上调表达,而在胚胎中过表达TBK1L却使许...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
NADPH氧化酶信号传导图(引自Brownetal2009)
图 1.2 NADPH 氧化酶的组装（引自 Groemping et al，2005）Fig 1.2 The assembling of NADPH (Groemping et al，2005)NADPH 氧化酶通常是静止的，当吞噬细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨等受到细胞因子、激素或病原微生物刺激时，具有杀灭微生物功能的上述细的 NADPH 氧化酶被激活，诱导吞噬细胞等发生了一系列的细胞质和细胞膜重装与组合。位于细胞质中的调节亚基 p40phox、p47phox、p67phox 及 Rac细胞色素 b558 基团上的 gp22phox 上富含脯氨酸的尾巴结合，改变了 gp91ph象，移除了 gp91phox 亚基上的 20 个氨基酸残基，形成具有完整生物活性的合体，使得 NADPH 氧化酶与其底物 NADPH 接触，释放电子发生氧化还原产生 ROS(图 1.2)(Groemping and Rittinger 2005；Nauseef 2004)。同时 p47ph被磷酸化，解除了细胞内部反应物之间的抑制作用，同时在细胞膜上与 p6p22phox 1:1结合。磷酸化的p47phox 有助于p40phox 和p67phox 构象改变与
nlm.nih.gov/Structure/cdd/docs/cdd_search.html) 氨基酸序列比对分析结果显示：TBK1L含有一个不完整的STKc_TBK1结构域。与TBK1相比，TBK1L缺少UBL_TBK1样结构域（图4.1）。使用Mega4.1邻接法构建了斑马鱼TBK1L同其它物种TBK1/TBK1L基因的系统进化树，结果表明，本实验所得的TBK1/TBK1L分子同鱼类TBK1/TBK1L聚为一枝，斑马鱼TBK1L与青鱂TBK1L亲缘关系最近，聚在一支。斑马鱼TBK1/TBK1L与其它脊椎动物TBK1/TBK1L聚为一大枝（图4.2）。37
本文编号：2921831
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
NADPH氧化酶信号传导图(引自Brownetal2009)
图 1.2 NADPH 氧化酶的组装（引自 Groemping et al，2005）Fig 1.2 The assembling of NADPH (Groemping et al，2005)NADPH 氧化酶通常是静止的，当吞噬细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨等受到细胞因子、激素或病原微生物刺激时，具有杀灭微生物功能的上述细的 NADPH 氧化酶被激活，诱导吞噬细胞等发生了一系列的细胞质和细胞膜重装与组合。位于细胞质中的调节亚基 p40phox、p47phox、p67phox 及 Rac细胞色素 b558 基团上的 gp22phox 上富含脯氨酸的尾巴结合，改变了 gp91ph象，移除了 gp91phox 亚基上的 20 个氨基酸残基，形成具有完整生物活性的合体，使得 NADPH 氧化酶与其底物 NADPH 接触，释放电子发生氧化还原产生 ROS(图 1.2)(Groemping and Rittinger 2005；Nauseef 2004)。同时 p47ph被磷酸化，解除了细胞内部反应物之间的抑制作用，同时在细胞膜上与 p6p22phox 1:1结合。磷酸化的p47phox 有助于p40phox 和p67phox 构象改变与
nlm.nih.gov/Structure/cdd/docs/cdd_search.html) 氨基酸序列比对分析结果显示：TBK1L含有一个不完整的STKc_TBK1结构域。与TBK1相比，TBK1L缺少UBL_TBK1样结构域（图4.1）。使用Mega4.1邻接法构建了斑马鱼TBK1L同其它物种TBK1/TBK1L基因的系统进化树，结果表明，本实验所得的TBK1/TBK1L分子同鱼类TBK1/TBK1L聚为一枝，斑马鱼TBK1L与青鱂TBK1L亲缘关系最近，聚在一支。斑马鱼TBK1/TBK1L与其它脊椎动物TBK1/TBK1L聚为一大枝（图4.2）。37
本文编号：2921831
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