枸杞LbMYB103基因在植物花器官发育中的功能初探
发布时间：2020-12-17 09:50
实验室前期以宁夏枸杞“宁杞1号”及其雄性不育突变体“宁杞5号”为材料,在分析其花药差异蛋白质组学的基础上,分离克隆了一个差异表达基因,经生物信息学分析得知,该基因属于R2R3-MYB类转录因子家族基因,命名为LbMYB103。在此基础上,本实验探究了枸杞LbMYB103基因的表达特征及其在植物生长发育过程中的调控作用,为明确该基因在枸杞生长及花药发育过程中可能的调控机制奠定一定基础。实验结果如下.:（1）以“宁杞1号”枸杞五个发育时期的花药为材料,利用荧光定量PCR技术分析LbMYB103基因随花药发育过程的表达特征。结果表明,LbMYB103基因在花药造孢细胞时期开始表达,小孢子母细胞时期表达量增加,四分体时期达到峰值,后期逐渐降低。（2）构建LbMYB103基因的原核表达载体LbMYB103-pET32a-BL21,利用IPTG进行体外诱导,经SDS-PAGE凝胶电泳分析得知,该基因能够在体外进行表达。（3）利用RT-PCR技术分离得到LbMYB103基因的完整开放阅读框（ORF）,构建植物过表达载体LbMYB103-pCAMBIA2301-LBA4404,并通过根瘤农杆菌介导法转...
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－４?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＥＴ３２ａ－ＢＬ２１菌检及酶切鉴定??Ｆｉｇ３－４?Ｃｏｌｏｎｙ?ＰＣＲ?ａｎｄ?ｅｎｚｙｍｅｓ?ｏｆ?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＥＴ３２ａ－ＢＬ２１??
LbMYBt03}CAMB1A2301-Iry的构趁
?３结果分析与讨论??以测序正确的ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ?Ｖｅｃｔｏｒ为模板进行亚克隆，大量扩增回收目的条带，??经Ｑｕｉｃｋｃｕｔ？ＳａｃＩ／ＸｂａＩ双酶切后继续用琼脂糖凝胶电泳回收（图３－７，?Ａ），抽提ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ??植物表达载体同样用Ｓａｃｌ／Ｘｂａｌ双酶切回收（图３－７，?Ｂ），过夜连接并转化ＤＨ５ａ大肠杆菌（图??３－７，?Ｃ）。ＰＣＲ鉴定转化子（图３－８，?Ａ），选择结果为阳性的单克隆进行培养，抽提质粒双酶??切验证（图３－８，?Ｂ），ＰＣＲ和双酶切检测结果一致，均到一条与目标条带相符的，大小为９７５?ｂｐ??的特异性条带，表明ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ－ＤＨ５ａ构建成功。??Ａ?．?＿２?３?４?Ｂ?１?Ｌ?３一＾１??■?＿??１?５ｂｐ??７?５０ｂｏ?；?丨丨??＾?１■卿??图?３－８?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ?的鉴定??Ｆｉｇ３－８?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬｂＭＹＢ?１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１?－ｋｙ??注：Ａ，重组子ＰＣＲ鉴定；Ｂ，重组子双酶切鉴定??（Ａ）?Ｍ，ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；ｌ－４，ＰＣＲ?鉴定结果；（Ｂ）Ｍ，ＤＬ１５０００?Ｍａｒｋｅｒ；Ｍｌ，ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；ｌ，质粒；２，重组质粒；３，Ｓａｃｌ?单酶??切重组质粒；４，?Ｓａｃｌ／Ｘｂａｌ双酶切重组质粒??Ｎｏｔｅ：?Ａ
【参考文献】：
期刊论文
[1]黑果枸杞和红果枸杞的比较[J]. 张璟,郭晔红,师建玲,丁小琴,李欠,陈垣. 农业科技与信息. 2018(10)
[2]植物MADS-box转录因子参与调控非生物胁迫的研究进展[J]. 姚琦园,李纷芬,张林成,周升恩. 江西农业学报. 2018(05)
[3]三种黑果枸杞组织培养技术初探[J]. 裴小鹏,金芳,李文娟,黄慧英. 甘肃农业大学学报. 2018(02)
[4]小麦细胞周期蛋白基因CDC25的原核表达及蛋白纯化[J]. 于宝佳,胡艳萍,刘彦妮,李开心,王华忠. 天津农业科学. 2018(03)
[5]基于转录组的楠木MYB转录因子的挖掘及分析[J]. 丁蒙蒙,时小东,顾雨熹,代娇,盛玉珍,徐莺,庄国庆. 广西植物. 2018(01)
[6]R2R3-MYB转录因子GmMYB184调节大豆异黄酮合成[J]. 朱莹,褚姗姗,张培培,程浩,喻德跃,王娇. 作物学报. 2018(02)
[7]森林草莓bZIP转录因子全基因组鉴定及在花药中的表达分析[J]. 唐月明,胡玥阳,陈思妤,刘勋菊,刘晓微,叶云天,陈清. 分子植物育种. 2018(09)
[8]黄果枸杞愈伤组织诱导及快繁技术研究[J]. 马彦军,杨万鹏,杨坤,马瑞. 干旱区资源与环境. 2017(06)
[9]胼胝质沉积与花粉发育[J]. 崔海芳,张凡,尹俊龙,郭瑛琪,岳艳玲. 云南农业大学学报(自然科学). 2017(03)
[10]花药绒毡层发育的转录调控机制研究进展[J]. 隋娟娟,曹兴,邓红祥,吴晨雨. 聊城大学学报(自然科学版). 2016(03)
博士论文
[1]枸杞雄性不育花药差异蛋白质组分析及3个相关基因的克隆[D]. 郑蕊.南京农业大学 2012
[2]转录因子MYB103调控花药发育分子机理以及绒毡层发育与功能转录调控途径的研究[D]. 朱骏.上海交通大学 2010
硕士论文
[1]一个新的棉花MYB基因的表达和功能研究[D]. 孙翔.华中师范大学 2013
[2]菜用大豆转录因子基因GmMYB103的表达及功能初步分析[D]. 袁玲玲.南京农业大学 2012
[3]拟南芥转录因子TDF1在花药发育过程中分子调控机理的研究[D]. 周茜.上海师范大学 2010
本文编号：2921837
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－４?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＥＴ３２ａ－ＢＬ２１菌检及酶切鉴定??Ｆｉｇ３－４?Ｃｏｌｏｎｙ?ＰＣＲ?ａｎｄ?ｅｎｚｙｍｅｓ?ｏｆ?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＥＴ３２ａ－ＢＬ２１??
LbMYBt03}CAMB1A2301-Iry的构趁
?３结果分析与讨论??以测序正确的ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ?Ｖｅｃｔｏｒ为模板进行亚克隆，大量扩增回收目的条带，??经Ｑｕｉｃｋｃｕｔ？ＳａｃＩ／ＸｂａＩ双酶切后继续用琼脂糖凝胶电泳回收（图３－７，?Ａ），抽提ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ??植物表达载体同样用Ｓａｃｌ／Ｘｂａｌ双酶切回收（图３－７，?Ｂ），过夜连接并转化ＤＨ５ａ大肠杆菌（图??３－７，?Ｃ）。ＰＣＲ鉴定转化子（图３－８，?Ａ），选择结果为阳性的单克隆进行培养，抽提质粒双酶??切验证（图３－８，?Ｂ），ＰＣＲ和双酶切检测结果一致，均到一条与目标条带相符的，大小为９７５?ｂｐ??的特异性条带，表明ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ－ＤＨ５ａ构建成功。??Ａ?．?＿２?３?４?Ｂ?１?Ｌ?３一＾１??■?＿??１?５ｂｐ??７?５０ｂｏ?；?丨丨??＾?１■卿??图?３－８?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ?的鉴定??Ｆｉｇ３－８?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬｂＭＹＢ?１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１?－ｋｙ??注：Ａ，重组子ＰＣＲ鉴定；Ｂ，重组子双酶切鉴定??（Ａ）?Ｍ，ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；ｌ－４，ＰＣＲ?鉴定结果；（Ｂ）Ｍ，ＤＬ１５０００?Ｍａｒｋｅｒ；Ｍｌ，ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；ｌ，质粒；２，重组质粒；３，Ｓａｃｌ?单酶??切重组质粒；４，?Ｓａｃｌ／Ｘｂａｌ双酶切重组质粒??Ｎｏｔｅ：?Ａ
【参考文献】：
期刊论文
[1]黑果枸杞和红果枸杞的比较[J]. 张璟,郭晔红,师建玲,丁小琴,李欠,陈垣. 农业科技与信息. 2018(10)
[2]植物MADS-box转录因子参与调控非生物胁迫的研究进展[J]. 姚琦园,李纷芬,张林成,周升恩. 江西农业学报. 2018(05)
[3]三种黑果枸杞组织培养技术初探[J]. 裴小鹏,金芳,李文娟,黄慧英. 甘肃农业大学学报. 2018(02)
[4]小麦细胞周期蛋白基因CDC25的原核表达及蛋白纯化[J]. 于宝佳,胡艳萍,刘彦妮,李开心,王华忠. 天津农业科学. 2018(03)
[5]基于转录组的楠木MYB转录因子的挖掘及分析[J]. 丁蒙蒙,时小东,顾雨熹,代娇,盛玉珍,徐莺,庄国庆. 广西植物. 2018(01)
[6]R2R3-MYB转录因子GmMYB184调节大豆异黄酮合成[J]. 朱莹,褚姗姗,张培培,程浩,喻德跃,王娇. 作物学报. 2018(02)
[7]森林草莓bZIP转录因子全基因组鉴定及在花药中的表达分析[J]. 唐月明,胡玥阳,陈思妤,刘勋菊,刘晓微,叶云天,陈清. 分子植物育种. 2018(09)
[8]黄果枸杞愈伤组织诱导及快繁技术研究[J]. 马彦军,杨万鹏,杨坤,马瑞. 干旱区资源与环境. 2017(06)
[9]胼胝质沉积与花粉发育[J]. 崔海芳,张凡,尹俊龙,郭瑛琪,岳艳玲. 云南农业大学学报(自然科学). 2017(03)
[10]花药绒毡层发育的转录调控机制研究进展[J]. 隋娟娟,曹兴,邓红祥,吴晨雨. 聊城大学学报(自然科学版). 2016(03)
博士论文
[1]枸杞雄性不育花药差异蛋白质组分析及3个相关基因的克隆[D]. 郑蕊.南京农业大学 2012
[2]转录因子MYB103调控花药发育分子机理以及绒毡层发育与功能转录调控途径的研究[D]. 朱骏.上海交通大学 2010
硕士论文
[1]一个新的棉花MYB基因的表达和功能研究[D]. 孙翔.华中师范大学 2013
[2]菜用大豆转录因子基因GmMYB103的表达及功能初步分析[D]. 袁玲玲.南京农业大学 2012
[3]拟南芥转录因子TDF1在花药发育过程中分子调控机理的研究[D]. 周茜.上海师范大学 2010
本文编号：2921837
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2921837.html
最近更新
教材专著
