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草莓CRISPR/Cas9基因组编辑技术体系建立和FaMAPK12基因功能分析

发布时间:2020-12-17 22:08
  草莓不仅是重要的园艺作物,同时因其生长周期短、基因组小、可以稳定遗传转化等特点也日益成为果实发育和成熟机理研究的模式材料。CRISPR/Cas9基因组编辑技术是近年来兴起的生命科学研究领域的重要技术,具有精确、便捷、高效的特点,其在草莓中的应用将极大地推动草莓遗传改良和分子生物学研究。本实验室前期研究证明,蔗糖可以作为信号调控草莓果实发育和成熟。为此,本研究首先在草莓中建立了 CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术,在此基础上,还对调控草莓果实成熟的蔗糖信号转导机制进行了研究。首先以二倍体(Fragariaxvescaa)和八倍体(Fragaria x ananassa)草莓果实为材料,研究了使用CRISPR/Cas9在草莓果实瞬时转化体系中进行基因组编辑的可行性。本研究设计了双靶点基因组编辑载体,两个sgRNA分别靶向FvMYB10和FvCHS。瞬时转化草莓果实后并通过PCR-RE(PCRRestriction enzyme assay)检测和测序检测发现,两个靶点位置都发生了碱基突变。以上结果表明,可以使用CRISPR/Cas9在草莓果实瞬时转化系统中进行基因组编辑。实现果实瞬... 

【文章来源】:中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:95 页

【学位级别】:博士

【部分图文】:

草莓CRISPR/Cas9基因组编辑技术体系建立和FaMAPK12基因功能分析


图1-1?RNA引导的Cas9核酸酶的示意

草莓CRISPR/Cas9基因组编辑技术体系建立和FaMAPK12基因功能分析


图1131??Fig.?1-1?Schematic?of?the?RNA-guided?Cas9?nuclease"?”.??

示意图,基因,核酸酶,反式激活


fAAAGUGGCACCGA?/??1??IIIIIIIG??3\UUUUUUCGUGGCU?Qasg??图1-1?RNA引导的Cas9核酸酶的示意图1131??Fig.?1-1?Schematic?of?the?RNA-guided?Cas9?nuclease"?”.??CRISPR?/?Cas9?基因组编辑工具来源于原核细菌?II?型?CRISPR?(clustered?regularly?interspaced??short?palindromic?repeats)/Cas适应性免疫系统ll4‘151。II型CRISPR系统包折Cas9核酸酶和两种非??编码?CRISPR?RNA(crRNA):前体?crRNA?(pre-crRNA)阵列和反式激活?crRNA?(tracrRNA)。??Pre-crRNA列阵包含多个被相同重复序夕丨J间隔开的Guide?RNA〇?tracrRNA的作用是协助将??1??

【参考文献】:
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本文编号:2922786

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