神农香菊（Chrysanthemum indicum var. aromaticum）CibHLH1基因克隆及其功能的初
发布时间：2020-12-18 12:25
神农香菊（Chrysanthewum inicuum var.aromaticum）生长于湖北神农架海拔2600米左右的地区,全株具有香气,含有多种化合物且具有抑菌的作用,是一种良好的精油提取及药物加工的原材料,是我国独有的珍贵花卉品种。其生存环境光照充足且强烈,易受低温、高强度辐射等危害,从基因层面研究神农香菊的生长发育和光合作用对改良神农香菊观赏特性及培育优良的神农香菊新品种具有十分重要的意义。bHLH转录因子对植物的生物进程以及逆境胁迫反应起重要的调控作用,参与调控花形态建成、果实的形成及色素的合成,本研究探究了神农香菊bHLH转录因子在其生长发育进程中的作用,通过转基因方法使CibHLH1基因在模式植物烟草中过量表达,来研究CibHLH1基因的调控潜能。本研究以神农香菊叶片RNA反转录的cDNA为模板,以bHLH-F/bHLH-R为特异性引物,通过PCR方法克隆得到神农香菊bHLH转录因子基因,将其命名为CibHLH1基因,利用生物信息学方法对CibHLH1基因进行分析,结果表明,CibHLH1基因的ORF框长度为633bp,共编码210个氨基酸,属HLH超家族,调控参与基因的...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ｂＨＬＨ二聚体与ＤＮＡ相结合［４６］??
１．２．１植物ｂＨＬＨ转录因子的结构特点及分类??１．２．１．１?ｂＨＬＨ转录因子的结构特点??ｂＨＬＨ转录因子因具有高保守性的ｂＨＬＨ结构域而得名［４Ｇ］（图１－３），ｂＨＬＨ结构??域由５０？６０个氨基酸构成，其功能上是完全不同的两个保守区域，即碱性氨基酸区域??（ｂａｓｉｃ?ｒｅｇｉｏｎ）和ａ螺旋１－环－ａ螺旋２区域（ＨＬＨ?ｒｅｇｉｏｎ）［气碱性氨基酸区域大致??有１０？１５个碱性氨基酸且位于ｂＨＬＨ结构域多肽链的Ｎ－端，这个区域主要与ＤＮＡ顺??式元件?Ｅ－ｂｏｘ?（５＇－ＣＡＮＮＴＧ－３’）结合，最常用的为?Ｇ－Ｂｏｘ?（５＇－ＣＡＣＧＴＧ－３＇），进而调??控基因的转录［４１／ｔ４］，半数的植物ｂＨＬＨ都具有一个高度保守的ＨＥＲ元件（Ｈｉｓ５－Ｇｌｕ９??－Ａｒｇｌ３），以此来与ＤＮＡ结合［４３，４４］。ａ螺旋１－环－ａ螺旋２区位于Ｃ端，具有４０￣５０??个氨基酸，主要由疏水氨基酸残基构成，利于ＨＬＨ之间相互作用形成二聚体或异源二??聚体，进而与其他ｂＨＬＨ蛋白相互作用［２８］（图１－２）。ｂＨＬＨ转录因子因其数量大，??种类多
以神农香菊的ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，以ｂＨＬＨ－Ｆ／ｂＨＬＨ－Ｒ为引物进行??ＰＣＲ扩増，ＰＣＲ产物经浓度为１％琼脂糖凝胶进行电泳检测，检测到一条约为７５０ｂｐ??的特异性扩增条带如图２－２。胶回收方法回收ＰＣＲ产物，将其与ｐＵＣ－Ｔ克隆载体连接??后转化大肠杆菌感受态ＤＨ５ａ，抗性筛选出５个阳性克隆并通过ＰＣＲ扩增检测如图２－??３。??Ｍ??７５０?ｂｐ??图２－２?Ｃ７Ｗ７Ｚ／厂基因ＰＣＲ结果??Ｆｉｇ．２－２?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣｉｂＨＬＨｌ?ｇｅｎｅ??－１３－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]茉莉酸甲酯对神农香菊毛状体及其分泌物的影响[J]. 高文杰,王想,何淼,周蕴薇. 北京林业大学学报. 2017(04)
[2]神农香菊不同株系间光合特性及叶绿素荧光特性比较分析[J]. 何淼,刘洋,焦宏斌,王想,金利妍,周蕴薇. 上海农业学报. 2017(02)
[3]UV-B辐射对神农香菊光合作用的影响[J]. 杨扬,焦宏彬,刘洋,王欢,何淼. 东北林业大学学报. 2017(01)
[4]神农香菊丛生芽的诱导及植株再生[J]. 马江,王长兰,谢佩佩,王静,梁宏伟. 热带作物学报. 2016(03)
[5]西瓜bHLH转录因子家族基因的鉴定及其在非生物胁迫下的表达分析[J]. 何洁,顾秀容,魏春华,杨小振,李好,马建祥,张勇,杨建强,张显. 园艺学报. 2016(02)
[6]植物细胞核雄性不育相关bHLH转录因子研究进展[J]. 刘永明,张玲,周建瑜,曹墨菊. 遗传. 2015(12)
[7]正交实验优化“神农”香菊顶芽的离体培养条件[J]. 雷霄飞,杨学领. 北方园艺. 2014(16)
[8]小麦盐胁迫相关基因TabHLH13的克隆与分析[J]. 符思路,刘国祥,张立超,夏川,赵光耀,贾继增,孔秀英. 植物遗传资源学报. 2014(05)
[9]臭氧胁迫对植物主要生理功能的影响[J]. 列淦文,叶龙华,薛立. 生态学报. 2014(02)
[10]葡萄bHLH转录因子家族全基因组分析[J]. 尹欢,蔡斌,李成慧,陈飞. 江西农业学报. 2013(09)
博士论文
[1]葡萄风信子MYB和bHLH转录因子对花青苷合成的调控研究[D]. 陈凯利.西北农林科技大学 2017
[2]拟南芥转录因子bHLH34和bHLH104调控铁平衡[D]. 李晓丽.中国科学技术大学 2016
[3]调控紫杉醇合成转录因子TcMYC和TcWRKY1的克隆及功能研究[D]. 李书涛.华中科技大学 2012
[4]苹果bHLH基因MdCIbHLH1克隆及功能分析[D]. 冯晓明.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]苹果bHLH转录因子家族的鉴定及表达分析[D]. 杨金华.西北农林科技大学 2017
[2]香雪兰类黄酮代谢相关bHLH转录因子基因的克隆及其功能鉴定[D]. 单晓彤.东北师范大学 2016
[3]神农香菊DiaMYB基因的表达特性及抗逆功能研究[D]. 刘颖竹.东北林业大学 2016
[4]UV-B辐射对神农香菊腺毛及光合生理特性影响[D]. 焦宏彬.东北林业大学 2016
[5]水稻缺铁响应转录因子OsIRO3与OsbHLH062功能的初步研究[D]. 王敏.浙江大学 2016
[6]神农香菊DiaMYB基因克隆及功能分析[D]. 高耀辉.东北林业大学 2014
本文编号：2923997
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ｂＨＬＨ二聚体与ＤＮＡ相结合［４６］??
１．２．１植物ｂＨＬＨ转录因子的结构特点及分类??１．２．１．１?ｂＨＬＨ转录因子的结构特点??ｂＨＬＨ转录因子因具有高保守性的ｂＨＬＨ结构域而得名［４Ｇ］（图１－３），ｂＨＬＨ结构??域由５０？６０个氨基酸构成，其功能上是完全不同的两个保守区域，即碱性氨基酸区域??（ｂａｓｉｃ?ｒｅｇｉｏｎ）和ａ螺旋１－环－ａ螺旋２区域（ＨＬＨ?ｒｅｇｉｏｎ）［气碱性氨基酸区域大致??有１０？１５个碱性氨基酸且位于ｂＨＬＨ结构域多肽链的Ｎ－端，这个区域主要与ＤＮＡ顺??式元件?Ｅ－ｂｏｘ?（５＇－ＣＡＮＮＴＧ－３’）结合，最常用的为?Ｇ－Ｂｏｘ?（５＇－ＣＡＣＧＴＧ－３＇），进而调??控基因的转录［４１／ｔ４］，半数的植物ｂＨＬＨ都具有一个高度保守的ＨＥＲ元件（Ｈｉｓ５－Ｇｌｕ９??－Ａｒｇｌ３），以此来与ＤＮＡ结合［４３，４４］。ａ螺旋１－环－ａ螺旋２区位于Ｃ端，具有４０￣５０??个氨基酸，主要由疏水氨基酸残基构成，利于ＨＬＨ之间相互作用形成二聚体或异源二??聚体，进而与其他ｂＨＬＨ蛋白相互作用［２８］（图１－２）。ｂＨＬＨ转录因子因其数量大，??种类多
以神农香菊的ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板，以ｂＨＬＨ－Ｆ／ｂＨＬＨ－Ｒ为引物进行??ＰＣＲ扩増，ＰＣＲ产物经浓度为１％琼脂糖凝胶进行电泳检测，检测到一条约为７５０ｂｐ??的特异性扩增条带如图２－２。胶回收方法回收ＰＣＲ产物，将其与ｐＵＣ－Ｔ克隆载体连接??后转化大肠杆菌感受态ＤＨ５ａ，抗性筛选出５个阳性克隆并通过ＰＣＲ扩增检测如图２－??３。??Ｍ??７５０?ｂｐ??图２－２?Ｃ７Ｗ７Ｚ／厂基因ＰＣＲ结果??Ｆｉｇ．２－２?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣｉｂＨＬＨｌ?ｇｅｎｅ??－１３－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]茉莉酸甲酯对神农香菊毛状体及其分泌物的影响[J]. 高文杰,王想,何淼,周蕴薇. 北京林业大学学报. 2017(04)
[2]神农香菊不同株系间光合特性及叶绿素荧光特性比较分析[J]. 何淼,刘洋,焦宏斌,王想,金利妍,周蕴薇. 上海农业学报. 2017(02)
[3]UV-B辐射对神农香菊光合作用的影响[J]. 杨扬,焦宏彬,刘洋,王欢,何淼. 东北林业大学学报. 2017(01)
[4]神农香菊丛生芽的诱导及植株再生[J]. 马江,王长兰,谢佩佩,王静,梁宏伟. 热带作物学报. 2016(03)
[5]西瓜bHLH转录因子家族基因的鉴定及其在非生物胁迫下的表达分析[J]. 何洁,顾秀容,魏春华,杨小振,李好,马建祥,张勇,杨建强,张显. 园艺学报. 2016(02)
[6]植物细胞核雄性不育相关bHLH转录因子研究进展[J]. 刘永明,张玲,周建瑜,曹墨菊. 遗传. 2015(12)
[7]正交实验优化“神农”香菊顶芽的离体培养条件[J]. 雷霄飞,杨学领. 北方园艺. 2014(16)
[8]小麦盐胁迫相关基因TabHLH13的克隆与分析[J]. 符思路,刘国祥,张立超,夏川,赵光耀,贾继增,孔秀英. 植物遗传资源学报. 2014(05)
[9]臭氧胁迫对植物主要生理功能的影响[J]. 列淦文,叶龙华,薛立. 生态学报. 2014(02)
[10]葡萄bHLH转录因子家族全基因组分析[J]. 尹欢,蔡斌,李成慧,陈飞. 江西农业学报. 2013(09)
博士论文
[1]葡萄风信子MYB和bHLH转录因子对花青苷合成的调控研究[D]. 陈凯利.西北农林科技大学 2017
[2]拟南芥转录因子bHLH34和bHLH104调控铁平衡[D]. 李晓丽.中国科学技术大学 2016
[3]调控紫杉醇合成转录因子TcMYC和TcWRKY1的克隆及功能研究[D]. 李书涛.华中科技大学 2012
[4]苹果bHLH基因MdCIbHLH1克隆及功能分析[D]. 冯晓明.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]苹果bHLH转录因子家族的鉴定及表达分析[D]. 杨金华.西北农林科技大学 2017
[2]香雪兰类黄酮代谢相关bHLH转录因子基因的克隆及其功能鉴定[D]. 单晓彤.东北师范大学 2016
[3]神农香菊DiaMYB基因的表达特性及抗逆功能研究[D]. 刘颖竹.东北林业大学 2016
[4]UV-B辐射对神农香菊腺毛及光合生理特性影响[D]. 焦宏彬.东北林业大学 2016
[5]水稻缺铁响应转录因子OsIRO3与OsbHLH062功能的初步研究[D]. 王敏.浙江大学 2016
[6]神农香菊DiaMYB基因克隆及功能分析[D]. 高耀辉.东北林业大学 2014
本文编号：2923997
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